Научные консультанты: Доктор медицинских наук, профессор. Малышев Игорь Юрьевич.


Чтобы посмотреть этот PDF файл с форматированием и разметкой, скачайте его и откройте на своем компьютере.
��1
На правах рукописи
ЧАУСОВА СВЕТЛАНА ВИТАЛЬЕВНА
Особенности оксидантной активности фагоцитов периферической крови
больных с непереносимостью нестероидных противовоспалительных
препаратов и обоснование патогенетической терапии непереносимости
нестероидных противовоспалительных препаратов
14.03.03 – патологическая физиология
– фармакология, клиническая фармакология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
доктора
медицинских наук
Москва 2016
��2
Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего
профессионального образования «Московский государственный медико - стоматологический
университет им. А.И. Евдокимова» Министерства здравоохранения Российской Федерации
(ГБОУ ВПО МГМСУ им. А.И. Евдокимова МЗ РФ).
Научные консультанты:
Доктор медицинских наук, профессор
Малышев Игорь Юрьевич
Доктор медицинских наук, профессор
Гуревич Константин Георгиевич
Официальные оппоненты:
Ушкалова Елена Андреевна,
доктор медицинских наук, профессор кафедры общей и
клинической фармакологии медицинского института Федерального государственного
автономного образовательного учреждения высшего профессионального образования
«Российский университет дружбы народов».
Васильев Андрей Глебович,
доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой
патологической физиологии с курсом иммунопатологии Государственного бюджетного
образовательного учреждения высшего профессионального образования «Санкт-Петербургский
государственный педиатрический медицинский университет» Министерства здравоохранения
Российской Федерации.
Ревякина Вера Афанасьевна
, доктор медицинских наук, профессор, заведующая отделением
аллергологии Клиник
Федерального государственного бюджетного научного учреждения
аучно-исследовательский институт питания».
Ведущее учреждение -
Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего
профессионального образования «Первый Московский государственный медицинский
университет им. И.М. Сеченова» Министерства здравоохранения Российской Федерации.
Защита состоится «_______» ________________2016 г. в ________ часов на заседании
Диссертационного Совета Д 208.072.05 на базе Государственного бюджетного образовательного
учреждения высшего профессионального образования «Российский национальный
исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова» Министерства здравоохранения
Российской Федерации по адресу: 117997, г. Москва, ул. Островитянова, д.1.
С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И.
Пирогова Минздрава России по адресу: 117997, г. Москва, ул. Островитянова, д.1. и на сайте
университета
http
rsmu
Автореферат разослан «______» _____________2016
Ученый секретарь диссертационного совета
кандидат медицинских наук, доцент
Кузнецова Татьяна Евгеньевна
��3
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность и степень разработанности темы исследования
В последнее время стремительно растет количество больных, страдающих
непереносимостью нестероидных противовоспалительных препаратов (НПВП).
Частота непереносимости НПВП при различных заболеваниях, по разным данным,
колеблется: при хронической крапивнице — от 23 до 28%, при полипозном
риносинусите (ПРС) - от 14 до 23%, при бронхиальной астме (БА) - от 4,3 до 21%,
при рините — около 1,5%, у практически здоровых — 0,3% (
Kowalski
. с
Клинически непереносимость чаще всего проявляется
симптоматикой со стороны органов дыхания (аспириновая астма/ринит) или со
стороны кожных покровов (крапивница/отек Квинке). С учетом широкого
использования НПВП и роста
числа
больных с непереносимостью данн
ой группы
препаратов не теряет актуальности вопрос изуч
ения механизмов непереносимости
В настоящее время считается, что в большинстве случаев непереносимость
НПВП не является истиной аллергической реакцией (
Kowalski
. с соавт., 2007;
с соавт., 2013;
Stevenson
. с соавт., 1982
. Из неиммунологических
механизмов непереносимости наибольшее значение придается способности НПВП
угнетать активность
циклооксигеназы (ЦОГ) и, тем самым, сдвигать баланс
метаболитов арахидоновой кислоты в сторону преимущественного
образования
лейкотриенов (ЛТ) (
., 2014;
Kowalski
. с соавт.,
2007;
Laidlaw
, 2013;
Narayanankutty
с соавт
, 2013
Последующее усиление синтеза
цистеиниловых
ЛТ
(цис
ЛТ) и активация воспалительных клеток провоцирует
развитие
клинической симптоматики
Однако с позиции циклооксигеназной
концепции нельзя объяснить, почему у части пациентов с непереносимостью
НПВП развиваются бронхиальные и назальные симптомы в ответ на вещества, не
являющиеся ингибиторами ЦОГ, в частности, на кон
сервант бензоат натрия,
сульфит
содержащие медикаменты, сукцинат натрия, входящий в состав многих
препаратов. Кроме того, известно, что интал
(стабилизатор мем
бран базофилов и
тучных клеток)
может блокировать развитие негативных реакций на
ацетилсалицилову
ю кислоту
(АСК)
, хотя и
влияет на метаболизм арахидоновой
кислоты
Пыцкий В.И.
с соавт.
, 1999; Хаитов Р.М.
с соавт.
, 2002
��4
В исследованиях последних лет появились данные об участии тромбоцитов,
лимфоцитов, тучных клеток, базофилов, полиморфно-ядерных лейкоцитов (ПМЛ),
эозинофилов в патогенезе непереносимости НПВП (Евсюкова Е.В., 2009;
Kowalski
. с соавт., 2007;
с соавт., 2013
. с соавт., 2015
. Однако
результаты исследований
противоречивы
, объясняют лишь отдельные звенья
патогенеза непереносимости НПВП
и не раскрывают
путей поиска
патогенетической терапии непереносимости НПВП. Таким образом, проблема
изучения механизмов непереносимости НПВП и поиска методов ее коррекции
остается открытой.
Многочисленными исследованиями установлено, что ПМЛ участвуют в
патогенезе аллергических процессов в качестве клеток-эффекторов. При этом
отмечается количественное изменение этих клеток в тканях, изменение их
функциональной активности (способность продуцировать активные формы
кислорода (АФК)
способность поглощать и переваривать бактерии,
ферментативная активность, хемотаксис и др.) (Гущин И.С.,1998; Луценко, М.Т.
соавт., 2000; Пинегин Б.В. с соавт., 2007; Пыцкий В.И. с соавт., 1999; Филатов,
., 1999)
Однако до настоящего времени не выяснены механизмы участия
фагоцитов периферической крови в патогенезе псевдоаллергических процессов, к
которым относится непереносимость НПВП.
Большую клиническую группу больных с непереносимостью НПВП
занимают больные с астматической триадой (АТ) или аспириновой астмой,
характеризующейся тремя основными клиническими проявлениями: собственно
непереносимостью НПВП. Известно, что у больных с АТ выявляются
рецидивирующие инфекции различной этиологии и локализации, чаще отмечаются
обострения инфекционного процесса как местной, так и системной локализации
наличие признаков вторичного иммунодефицитного состояния (Бондарева Г.П.,
2009). Наличие частых инфекционных осложнений у больных с АТ могут
свидетельс
твовать о том, что у этих лиц имеется недостаточность в
неспецифических или иммунных защитных механизмах, возможно,
недостаточность фагоцитарного звена иммунитета. Кроме того, проведенные
ранее нами исследования показали также изменение оксидантной активности ПМЛ
риферической крови под влиянием НПВП у больных с непереносимостью
данных препаратов разных клинических групп (Чаусова С.В. с соавт., 1997). Так,
��5
добавление салицилата
натрия и
метамизола натрия к пробам крови больных с
непереносимостью
и/или метамизола натрия сопровождалось
ингибированием стимулированной сульфатом бария люминол-зависимой
хемилюминесценции (СЛХЛ) крови, в то время как у здоровых доноров показатели
СЛХЛ крови под воздействием этих НПВП были достоверно выше по сравнению с
таковыми данных больных. Между тем, до настоящего времени не известно,
связаны ли выявленные различия СЛХЛ крови под воздействием НПВП у
здоровых доноров и больных с непереносимостью НПВП исключительно с
влиянием на ПМЛ крови биологически активных веществ
(медиаторов,
цитокинов) плазмы, или все же существуют какие-то особенности окислительного
метаболизма ПМЛ у данной группы больных, проявляющиеся при воздействии на
ПМЛ НПВП.
Известно, что непереносимость НПВП нередко сочетается с
непереносимостью пищевых красителей (Пыцкий В.И., 1999; Хаитов Р.М., 2002),
на которые часто развиваются псевдоаллергические реакции (Пыцкий В.И., 1999).
Возникает вопрос, будут ли происходить изменения СЛХЛ крови под влиянием
пищевых красителей у пациентов с их непереносимостью, аналогичные
изменениям СЛХЛ крови под влиянием НПВП, а также каковы механизмы
возможных изменений СЛХЛ, и существуют ли общие механизмы изменения
СЛХЛ крови под влиянием псевдоаллергенов (пищевых красителей и НПВП)?
Известно также, что у пациентов с АТ определяется более высокий уровень
активности индуцибельной
синтазы
iNOS
в эпителии носовых полипов и,
следовательно, более высокий уровень
в выдыхаемом воздухе
по сравнению с
таковым у пациент
ов с полипозом носа
и БА без непереносимости НПВП
с соавт, 2002
. Между тем, до настоящего времени не известно
существует ли
зависимость между степенью подавления СЛХЛ крови под влиянием НПВП у
больных с АТ и уровнем активности
фагоцитов периферической крови.
Анализируя вышесказанное, сформировалось представление о наличии
изменений функциональной (оксидантной) активности фагоцитов периферической
крови у больных с непереносимостью НПВП, что обусловило актуальность
проведения настоящей работы.
Целью
настоящей работы явилось
пределение общих закономерностей
изменения оксидантной активности фагоцитов периферической крови у больных с
��6
непереносимостью нестероидных противовоспалительных препаратов разных
клинических групп, а также выяснение механизмов изменения оксидантной
активности фагоцитов для поиска патогенетической терапии непереносимости
нестероидных противовоспалительных препаратов.
Выполнение поставленной цели требует решения следующих
задач
1. Определить общие закономерности продукции активных форм кислорода
полиморфно-ядерными лейкоцитами периферической крови у больных с
непереносимостью нестероидных противовоспалительных препаратов разных
клинических групп и у здоровых доноров.
2. Определить закономерности продукции активных форм кислорода полиморфно-
ядерными лейкоцитами периферической крови при воздействии комплексным
бактериальным антигеном
Staphylococcus
у больных с непереносимостью
нестероидных противовоспалительных препаратов и здоровых доноров.
3. Исследовать общие закономерности изменения продукции активных форм
кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами периферической крови под
влиянием псевдоаллергенов (нестероидных противовоспалительных препаратов,
тартразина) у больных с различными клиническими проявлениями
непереносимости данных псевдоаллергенов и у здоровых доноров.
4. Изучить вклад НАДФН-оксидазы в изменение продукции активных форм
кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови под влиянием
псевдоаллергенов (нестероидных противовоспалительных препаратов, тартразина)
у больных с различными клиническими проявлениями непереносимости данных
псевдоаллергенов.
5. Выявить медиаторные механизмы регуляции продукции активных форм
кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови, участвующие в патогенезе
непереносимости псевдоаллергенов (нестероидных противовоспалительных
препаратов, тартразина), у больных с различными клиническими проявлениями
непереносимости данных псевдоаллергенов.
6. Определить цитокиновые механизмы регуляции продукции активных форм
кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови у больных с
непереносимостью псевдоаллергенов (нестероидных противовоспалительных
препаратов, тартразина) разных клинических групп.
��7
7. Изучить закономерности продукции оксида азота фагоцитами периферической
крови у больных с астматической триадой.
8. Исследовать зависимость между выраженностью изменений продукции
активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами под влиянием
нестероидных противовоспалительных препаратов и фазой течения заболевания у
больных с астматической триадой.
9. Выявить зависимость между выраженностью изменений продукции активных
форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами под влиянием нестероидных
противовоспалительных препаратов, тартразина и давностью развития
непереносимости у больных с различными клиническими проявлениями
непереносимости данных псевдоаллергенов.
10. Обосновать применение метода стимулированной сульфатом бария люминол-
зависимой хемилюминесценции крови для диагностики
повышенной
чувствительности к
псевдоаллергенам (
нестероидным противовоспалительным
препаратам
, пищевым красителям) и персонифицированного подбора
патогенетической терапии.
Научная новизна
Впервые определено, что суммарная продукция АФК, в том числе продукция
супероксидного анион радик

) ПМЛ периферической крови, различна у
пациентов с непереносимостью НПВП разных клинических групп
Впервые выявлено, что у пациентов с
в стадии ремиссии,
сенсибилизированных стафилококковыми энтеротоксинами, наблюдается
снижение праймирующего влияния антигенов (
Staphylococcus
выработку АФК ПМЛ цельной крови и выделенными ПМЛ по сравнению с
здоровыми
донорами, что связано со снижением активности НАДФН
оксидазы
ПМЛ. В то же время при наличии сенсибилизации организма стафилококковыми
энтеротоксинами прединкубация проб крови со специфическим аллергеном
Staphylococcus
aureus
сопровождается значительным
увеличением продукции
АФК ПМЛ
по сравнению
донорами, при этом активность НАДФН
оксидазы
ПМЛ у этих больных снижена по сравнению с таковой
здоровых
Определено, что прединкубация крови с псевдоаллергенами (НПВП,
тартразином) у больных с повышенной чувствительностью к соответствующим
��8
псевдоаллергенам сопровождается дозозависимым ингибированием СЛХЛ крови,
при этом практически при всех используемых концентрациях псевдоаллергенов
показатели СЛХЛ крови больных достоверно ниже, чем у здоровых доноров.
Установлено, что одним из механизмов ингибирования СЛХЛ крови под
влиянием НПВП у больных с непереносимостью данных препаратов является
снижение активности НАДФН-оксидазы ПМЛ относительно таковой здоровых
доноров, вместе с тем НАДФН-оксидаза
не вносит вклад в реализацию
ингибирования СЛХЛ крови под влиянием тартразина у пациентов с
непереносимостью этого красителя.
Впервые выявлено, что феномен подавления СЛХЛ крови под влиянием
псевдоаллергенов (НПВП, тартразина) у больных с их непереносимостью
опосредуется участием медиаторов. Вклад Н1- и Н2- гистаминовых, 5-НТ2
серотониновых и
-лейкотриеновых рецепторов в развитие феномена
ингибирования СЛХЛ крови под воздействием НПВП, тартразина зависит от
химической природы псевдоаллергенов и от клинических проявлений
непереносимости.
Установлено, что активность
фагоцитов повышена у больных с
внению с таковой у
здоровых
доноров и у больных с атопической
без
полипоза носа и непереносимости НПВП. В стадии обострения хронического
бронхита и астмы активность
фагоцитов больных с
выше, чем в стадии
ремиссии.
Впервые доказано, что степень подавления СЛХЛ крови под влиянием
псевдоаллергенов (НПВП, тартразина) у пациентов с их непереносимостью зависит
от времени, прошедшего с момента возникновения непереносимости
псевдоаллергенов.
Впервые обосновано применение хемилюминесцентного теста для
персонифицированного подбора патогенетической терапии повышенной
чувствительности к псевдоаллергенам (НПВП, пищевым красителям).
Теоретическая значимость работы
заключается в расширении
представлений об особенностях оксидантной активности фагоцитов
периферической крови у больных с непереносимостью НПВП с различными
клиническими проявлениями, что углубляет понимание патогенеза
��9
непереносимости НПВП и создает основу для разработки новых подходов к
патогенетически обоснованной терапии указанной непереносимости.
Практическая значимость работы

На основании полученных экспериментальных данных установлена
возможность применения метода стимулированной сульфатом бария люминол-
зависимой хемилюминесценции крови для диагностики
повышенной
чувствительности к псевдоаллергенам (НПВП, тартразину)
Обосновано применение хемилюминесцентного теста для
персонифицированного подбора патогенетической терапии повышенной
чувствительности к псевдоаллергенам (НПВП, тартразину
Вынесено положительное решение о выдаче патента на изобретение от
23.11.2015 по
заявке
«Способ диагностики
повышенной чувствительности
к псевдоаллергенам и подбора противоаллергической терапии».
Дата поступления
заявки: 22.
04.2014. Входящий номер: 025205.
Регистрационный номер: 2014116060.
На основании полученных экспериментальных данных установлена
возможность применения метода стимулированной сульфатом бария люминол-
зависимой хемилюминесценции крови для диагностики
vitro
специфической
сенсибилизации организма к бактериальным аллергенам
Подана патентная заявка на изобретение «Способ диагностики
специфической сенсибилизации организма к бактериальным аллергенам».
Дата
поступления заявки: 19.
11.2014. Входящий номер: 074551.
Регистрационный
номер: 2014146260.
Основные положения, выносимые на защиту
1. Суммарная продукция АФК ПМЛ периферической крови, в том числе продукция
, различна у пациентов с непереносимостью НПВП разных клинических групп.
2. У пациентов с АТ в стадии ремиссии, несенсибилизированных
стафилококковыми энтеротоксинами, наблюдается снижение праймирующего
влияния
Staphylococcus
на выработку АФК
Л цельной крови и
выделенными ПМЛ по сравнению с донорами, что связано со снижением
активности НАДФН
оксидазы ПМЛ.
У пациентов с АТ в стадии ремиссии,
сенсибилизированных стафилококковыми энтеротоксинами, прединкубация проб
крови со специфическим аллерге
ном (
Staphylococcus
aureus
сопровождается
��10 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ;значительным увеличением продукции АФК ПМЛ по сравнению со здоровыми
донорами, при этом активность НАДФН-оксидазы ПМЛ у этих больных снижена
по сравнению с таковой здоровых доноров.
. Псевдоаллергены (НПВП, тартразин) оказывают дозозависимое ингибирующее
влияние на СЛХЛ крови больных с их непереносимостью, при этом практически
при всех используемых концентрациях псевдоаллергенов показатели СЛХЛ крови
больных достоверно ниже, чем у здоровых доноров.

Ингибирование СЛХЛ крови под влиянием НПВП у больных с
непереносимостью данных препаратов связано со снижением активности НАДФН-
оксидазы ПМЛ относительно таковой здоровых доноров. НАДФН-оксидаза ПМЛ
не вносит вклад в реализацию ингибирования СЛХЛ крови под влиянием
тартразина у пациентов с непереносимостью данного пищевого красителя.
. Феномен подавления СЛХЛ крови под влиянием псевдоаллергенов (НПВП,
тартразина) у больных с их непереносимостью опосредуется участием медиаторов.
Вклад Н1- и Н2- гистаминовых, 5-НТ2 серотониновых и цис-лейкотриеновых
рецепторов в развитие феномена ингибирования СЛХЛ крови под воздействием
НПВП, тартразина зависит от химической природы последних и от клинических
проявлений непереносимости.
. Активность
iNOS
фагоцитов повышена у
больных с
по сравнению с таковой
здоровых
доноров и больных с атопической
без полипоза носа и
непереносимости НПВП.
. Степень подавления СЛХЛ крови под влиянием псевдоаллергенов (НПВП,
тартразина) у пациентов с их непереносимостью зависит от времени, прошедшего с
момента возникновения непереносимости данных псевдоаллергенов.
Апробация работы
состоялась на совместной научной конференции кафедр
патологической физиологии, фармакологии ГБОУ ВПО МГСМУ им.
Евдокимова МЗ РФ и общей патологии медико-биологического факультета ГБОУ
РНИМУ им. Н.И. Пирогова МЗ РФ от 04 июня 2015 года.
Материалы диссертационной работы доложены
: конгрессе по ЛОР болезням
(Вильнюс, 2005);
XVI
, XIХ, XXI Российском нац
иональном конгрессе «Человек
и лекарство» (Москва,
2007, 2009, 2012, 2014 г.г.
); н
аучно
практической конференции
«Медико
биологические науки для теоретической и клиничес
кой медицины»
(Москва, 2008); н
аучно
практической конференции с международным участием
��11 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ;«Профилактика 2014» (Москва, 2014);
международной конференции «
High
medical
technologies
XXI
century
» (
Benidorm
Spain
2015).
Внедрение результатов работы
произведено в практику ГБУЗ «Городская
поликлиника №63 Департамента здравоохранения г. Москвы», филиал №3;
организационно-методическую работу Республики Мордовия Министерством
здравоохранения Республики Мордовия (Приказ №734-с от 23.04.2014), в
организационно-методическую работу Рязанской области Министерством
равоохранения Рязанской области (Приказ № ВГ/11-7679 от 26.08.2014), а также
в учебный процесс кафедры общей патологи
медико-биологического факультета
ГБОУ ВПО РНИМУ им.
Пирогова МЗ РФ, кафедры патологической
физиологии ГБОУ ВПО МГМСУ им. А.И. Евдокимова МЗ РФ.
Публикации результатов исследования.
По результатам исследования
опубликовано 24 печатных работы, из них 16 статей - в российских научных
рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования и
науки Российской Федерации. Поданы 2 патентные заявки.
Личный вклад автора.
Автору принадлежит ведущая роль в планировании
исследования, наборе клинического материала, проведении экспериментальных
исследований, анализе и обобщении полученных результатов. Вклад автора
является определяющим и заключается в непосредственном участии на всех этапах
настоящего исследования: от постановки задач до обсуждения результатов в
научных публикациях и докладах и их внедрении в практику. В статьях,
написанных в соавторстве, авторский вклад составляет не менее 80%.
Структура и объем диссертации.
Диссертация изложена на 305 страницах
машинописи. Состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов
исследования, четырех глав собственных результатов исследования, обсуждения
результатов, заключения, выводов, списка литературы, состоящего из 99
отечественных и 262 иностранных источников, 1 приложения. Текст диссертации
иллюстрирован 20 таблицами и 24 рисунками.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Материалы и методы исследования
Характеристика пациентов.
Объектом исследования были 146 пациентов с
непереносимостью НПВП, находившихся на обследовании и лечении в ФГБУ
��12 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ;«ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России; ГБУЗ «Городская поликлиника
№62 Департамента здравоохранения г. Москвы», филиал №3: 54 мужчины и 92
женщины в возрасте от 17 до 75 лет, средний возраст составлял 42,3±1,8 лет. У всех
пациен
тов по данным анамнеза и результатам теста торможения естественной
миграции лейкоцитов
имелась непереносимость более
одного
НПВП. У 29
обследуемых лиц непереносимость НПВП сочеталась с непереносимостью
пищевого красителя тартразина.
пациентов непереносимость
псевдоаллергенов проявлялась реакциями со стороны органов дыхания
(бронхоспазм, ринит), у 48
реакциями со стороны кожных покро
вов (крапивница
и/или отек Квинке).
сыворотке
всех обследованных пациентов специфические
АСК
, метамизолу
натрия
, диклофенаку
натрия
, тартразину не были
выявлены
Критерии включения пациентов в исследование: приступы экспираторного
диспноэ, ринит, крапивница, отек Квинке при приеме НПВП (АСК и/или
метамизола натрия и/или диклофенака натрия) в любой лекарственной форме
(инъекции, таблетки, драже), а также при употреблении пищевых продуктов,
напитков, лекарственных препаратов, окрашенных тартразином. Критерии
исключения: прием антигистаминных, антисеротониновых, антилейкотриеновых
препаратов, кромоглициевой кислоты (КГК), системных глюкокортикостероидов,
НПВП за
2 недели и менее до исследования. Критерии невключения: состояние
огольного или наркотического опьянения, невозможность забора венозной
крови, неподписание информированного согласия на проведение исследования.
Контрольная группа практически здоровых людей состояла из 132 человек
(79 женщин и 53 мужчин) в том же возрастном диапазоне, средний возраст:
35,6±1,9, не принимавших НПВП и противоаллергические препараты в
ближайшие 2 недели до эксперимента.
Для исследования использовали гепаринизированную венозную кровь
объемом 10,0 мл. Все пациенты и здоровые доноры перед началом исследования
подписали добровольное информированное согласие на проведение исследования.
Клиническое исследование одобрено Межвузовским Комитетом по этике, протокол
-12 от 17.05.2012 г.
Выделение ПМЛ крови
осуществляли
по методу Воу
А. (Воу
А., 19
) из
ринизированной венозной крови (2
0 Ед/мл). Подсчет ПМЛ производил
по
��13 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ;общепринятой методике в камере Горяева под световым микроскопом. Выход
ПМЛ составлял 85-95%. Жизнеспособность клеток, определяемая в тесте с
трипановым синим, составляла не менее 97%.
Определение суммарной продукции АФК ПМЛ
производили с помощью
метода СЛХЛ
Измерение хемилюминесценции (
) проводили на
биохемилюминесцентном анализаторе БЛМ 3606М - 01, сигнал от которого
поступал на персональный компьютер и анализировался с помощью программы
(СКТБ «Наука» КНЦ СО РАН, Россия).
Для этого из
образцов цельной
крови или суспензии
выдел
енных
ПМЛ отбирали объемы, содержащие 1х10
лейкоцитов
и доводили их до 0,70 мл средой Хенкса
(рН=7,45)
. В кювету
хемилюминометра вносили 0,7
мл пробы
и 0,15 мл активатора свечения
юминола
(2×10
позволяет регистрировать
суммарную выработку
разных
видов АФК
(Владимиров Ю.А. и соавт., 198
Далее измеряли уровень
спонтанной ХЛ.
Затем
добавляли 0,15 мл стимулятора свече
ния
сульфата бария
(2мг/мл)
и регистрировали уровень стимулированной ХЛ. Измерение ХЛ
проводили в режиме постоянного перем
ешивания при температуре 37˚С. Конечный
объем проб составлял 1 мл. С помощью компьютерной программы
BLM
Obrab
определяли площадь под кривой ХЛ
хл, отражающую светосумму
свечения
Определение продукции О
ПМЛ
производили с помощью метода
стимулированной сульфатом бария люцигенин-зависимой хемилюминесценции
(СЛЦХЛ
Данный метод аналогичен методу СЛХЛ. Различие состоит в том, что в
качестве активатора свечения использовался люцигенин (2х10
-3
М), который
является
высокочувствительным хемилюминесцентным зондом на О
(Владимиров Ю.А. с соавт., 1989).
Регистрируемая СЛЦХЛ отражает количество
, образовавшегося в результате активации НАДФН-оксидазы ПМЛ при
воздействии стимула. С помощью компьютерной программы
пределяли
прямо пропорциональн
активности НАДФН
оксидазы ПМЛ
при действии стимула.
Определение праймирующего влияния комплексного антигена
Staphylococcus
aureus
ПМЛ
Комплексный
АГ
Staphylococcus
aureus
получали
штаммов
бактерий
клинических изолятов методом
приготовления
бактериальных комплексов на целлофановом диске (Федосеева В.Н. и соавт., 2001).
Полученные маточные суспензии представляли собой комплекс
ный
АГ,
��14 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ;содержащий 1х10
микробных клеток на 1 мл суспензии. Для изучения
аймирующего влияния комплексного АГ
Staphylococcus
aureus
на ПМЛ из
образцов
цельной
крови или суспензии выделенных ПМЛ отбирали объемы,
содержащие 1х10
лейкоцитов
и доводили их до 0,69 мл средой Хенкса. Затем к
полученным образцам добавляли 0,01 мл
комп
лексного
АГ
Staphylococcus
различных концентрациях (5х10
микробных клеток
/мл). В контрольные
пробы
вносили
физиологич
еский раствор в том же объеме.
Каждую пробу
нкубировали в течение 60 минут
при 37ºС
при постоянном перемешивании. После
инкубации одновременно регистрировали
СЛХЛ и СЛЦХЛ
как описано выше,
затем
определяли
При оценке влияния
Staphylococcus
на ХЛ
ПМЛ
вычисляли
индекс соотношения площадей под кривыми ХЛ (ИП), как отношение
хл опытной пробы (
с АГ
Staphylococcus
aureus
) к
хл контрольной пробы
хл опыт/
хл контр.)
Для определения влияния псевдоаллергенов (НПВП, тартразина) на
люминол- и люцигенин-зависимую ХЛ цельной крови и клеточной суспензии
из образцов цельной крови или суспензии выделенных ПМЛ отбирали объемы,
содержащие 1х10
лейкоцитов, и доводили их до 0,69 мл средой Хенкса. Затем к
полученным образцам добавляли 0,01 мл растворенного исследуемого
псевдоаллергена в различных концентрациях: салицилат натрия в конечных
концентрациях от 0,06 мМ до 12 мМ, метамизол натрия - от 0,6 мкМ до 600 мкМ,
диклофенак натрия - от 0,6 мкМ до 300 мкМ, тартразин- от 0,4 мкМ до 2000 мкМ.
В качестве разводящей жидкости для салицилата натрия, метамизола натрия и
тартразина использовали физиологический раствор, для диклофенака натрия- воду
для инъекций. В контрольные пробы вместо исследуемого псевдоаллергена
добавляли разводящую жидкость в том же объеме. Каждую пробу инкубировали в
течение 45 минут при 37ºС при постоянном перемешивании. Жизнеспособность
ПМЛ за время инкубации существенно не изменялась. После инкубации
одновременно регистрировали СЛХЛ и СЛЦХЛ по описанным выше методикам и
определяли
При оценке влияния исследуемых
псевдоаллергенов
на ХЛ крови
и суспензии ПМЛ
определяли
как отношение
опытной
пробы
псевдоаллергеном)
контрольной проб
��15 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ; &#x/MCI; 1 ;&#x/MCI; 1 ;Для определения влияния блокаторов рецепторов (клемастина,
ранитидина, кетансерина, зафирлукаста) и стабилизатора мембран базофилов
и тучных клеток (КГК
в смеси с псевдоаллергенами (НПВП, тартразином) на
люминол-зависимую ХЛ крови
из образцов цельной крови отбирали объемы,
содержащие 1х10
лейкоцитов, и доводили их до 0,68 мл средой Хенкса (в опытах
с клемастином, ранитидином и КГК
до 0,687 мл (в опытах с кетансерином и
зафирлукастом). Затем в пробы вносили 0,01 мл растворов клемастина,
ранитидина, КГК; 0,003 мл растворов кетансерина, зафирлукаста в конечных
концентрациях
эквивалентных 1 средней терапевтической дозе (ЭСТД), после чего
инкубировали в течение 15 минут при 37ºС при постоянном перемешивании.
качестве разводящей жидкости для клемастина, ранитидина и КГК использовали
физиологический раствор, для кетансерина и зафирлукаста – диметилсульфоксид.
Затем одну часть полученных проб использовали в качестве опытных, для чего в
пробы вводили 0,01 мл растворов салицилата натрия, метамизола натрия,
диклофенака натрия или тартразина в конечных концентрациях 3 мМ, 6 мкМ, 6
мкМ, 4 мкМ, соответственно, а другую часть - в качестве контрольных, вводя
разводящую жидкость для псевдоаллергена, и осуществляли повторное
инкубирование в течение 45 минут при 37ºС в тех же условиях. Жизнеспособность
ПМЛ за время инкубации существенно не изменялась. В кювету хемилюминометра
вносили 0,7 мл пробы после инкубации и 0,15 мл люминола (2мМ). Далее
регистрировали уровень спонтанной ХЛ, затем стимулированной ХЛ, как описано
выше, и определяли
При оценке влияния исследуемых препаратов на ХЛ
крови
вычисляли
, как отношение
хл опытной пробы (с псевдоал
лергеном в
смеси с блокаторами рецепторов или
КГК
) к
хл контрольной пробы
блокаторами рецепторов или
КГК
Для определения влияния
блокатора
iNOS
аргинина
в смеси
с НПВП
люминол
зависимую
ХЛ цельной крови
из образцов цельной крови
отбирали объемы, содержащие 1х10
лейкоцитов, и доводили их до 0,68 мл средой
Хенкса. Затем в пробы вносили 0,01 мл раствора
нитро
аргинина
LNNA
конечных концентрациях
от 0,0
мкМ до
мкМ
, после чего инкубировали в
течение 15 минут при 37ºС пр
и постоянном перемешивании. Далее в пробы
добавляли
салицилат
натрия
или
метамизол натрия
конечных концентрациях
��16 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ;3,0 мМ и 6 мкМ, соответственно, после чего инкубировали еще 45 минут в тех же
условиях. В качестве разводящей жидкости для
использовали
воду для
инъекций. К контрольным пробам добавляли раствор
в том же объеме.
Жизнеспособность ПМЛ за время инкубации существенно не изменялась. В кювету
хемилюминометра вносили
0,7 мл пробы после инкубации и
0,15 мл люминола
(2мМ). Далее р
егистрировали уровень спонтанн
ой ХЛ, затем стимулированной ХЛ
определяли
При оценке влияния
в смеси с НПВП
на ХЛ крови
вычисляли
ИП, как отношение
хл опытной пробы (с
LNNA
в смеси с НПВП
) к
хл контрольной пробы
Для определения влияния плазменных факторов на СЛХЛ суспензии
осуществляли прединкубацию проб крови
лейкоцитов) больных с
непереносимостью АСК и здоровых доноров с салицилатом натрия в конечной
концентрации 3,0 мМ в течение 45 минут при 37ºС при постоянном
перемешивании. Следует отметить, что указанная концентрация салицилата натрия
оказывает угнетающее воздействие на СЛХЛ крови больных с непереносимостью
, в отличие от здоровых доноров, у которых на данной концентрации
подавления СЛХЛ крови не происходит.
нтрольные пробы инкубировали в тех
же условиях с равным объемом физиологического раствора. Затем пробы крови
центрифугировали в течение 3 минут на 1000 оборотах/мин., а полученную плазму
добавляли в образцы суспензии ПМЛ (1х10
ПМЛ) доноров, после чего доводили
объем содержимого проб суспензии ПМЛ раствором Хенкса до 0,7 мл. Полученные
пробы снова инкубировали в течение 45 минут при 37ºС при постоянном
перемешивании, после чего регистрировали спонтанную и стимулированную ХЛ,
как описано ранее, и определяли
, отражающую светосумму свечения.
Культивирование суспензии лейкоцитов,
выделенных из
гепаринизированной венозной крови (20 ЕД/мл), осуществляли следующим
образом. Лейкоциты в стандартной питательной среде
RPMI
1640 в стерильных
условиях
помещали в лунки стерильных культуральных планшетов из расчета
лейкоцитов на 1 лунку 48
луночного планшета. Планшет с лейкоцитами
помещали в
инкубатор
(содержание СО
составляло 5%)
и инкубировали в
течение часа при
37ºС. После инкубации п
итательная среда из всех лунок
клетками отбиралась и заменялась на следующую инкубационную
смесь: 0,5 мл
питательной среды
фетальная бычья сыворотка (
10%) +
антибиотик
(пенициллин
��17 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ;/ стрептомицин, 100
/мл / 100 мкг/мл). Затем в опытные пробы вносили 0,01 мл
салицилата натрия, метамизола натрия или диклофенака натрия в
конечных концентрациях 1,5 мМ, 3 мкМ, 3 мкМ, соответственно. В контрольные
пробы вместо указанных препаратов добавляли физиологический раствор или воду
для инъекций в том же объеме. После этого планшет с лейкоцитами вновь
помещали в
инкубатор и инкубировали в течение часа при 37ºС. После
инкубации в каждую лунку вносили 0,01 мл стимулятора - сульфата бария
(2мг/мл), после чего планшет снова помещали в СО
инкубатор и инкубировали в
течение 18 часов в тех же условиях.
Определение содержания метаболитов оксида азота в культуральной
среде.
Учитывая, что в водной среде нитрит-ион крайне нестабилен и быстро
переходит в нитрат-ион, для количественного определения уровней метаболитов
предварительно проводилась обработка проб с помощью кадмиевых
редукторов, в результате чего происходило восста
новление нитратов в нитриты.
Затем с помощью реакции Грисса спектрофотометрически определялось
содержание нитритов в культуральной среде по стандартной методике
Redente
. с соавт., 2009
Для определения концентрации цитокинов предварительно осуществляли
подготовку образцов плазмы.
Для этого
в образцы крови, содержащие 3х10
лейкоцитов, вносили 5 мкл растворов салицилата натрия, метамизола натрия,
диклофенака натрия, тартразина в конечных концентрациях 9мМ, 18мкМ, 18мкМ,
12мкМ, соответственно. Контрольные пробы содержали равный объем разводящей
жидкости. Полученные пробы тщательно ресуспензировали и инкубировали в
течение 1 часа при 37°С. Жизнеспособность клеток, определяемая окрашиванием
трипановым синим, за время инкубации существенно не изменялась. Далее пробы
крови центрифугировали в течение 5 минут при 3000 об/мин. Полученную
сыворотку использовали в качестве источника исследуемых цитокинов.
Определение уровня цитокинов проводили
методом твердофазного
иммуноферментного анализа
(ИФА) («сэндвич»-вариант ИФА) (аппарат
microplate
reader
Bio
model
680, США) с использованием наборов для
ределения цитокинов ФНО
α, ИНФ
γ, ИЛ
1β, ИЛ
8, ИЛ
��18 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ;Статистическая обработка результатов
.
Анализ полученных результатов
проводили с помощью статистических компьютерных программ «
STATISTICA
for
Windows
версия
7.0
Soft
приложения
Microsoft
Office
обработке результатов пользовались параметрическими и
непараметрическими статистическими методами. Для нормально распределенных
переменных вычисляли М
среднее арифметическое для анализируемой группы
показателей,
стандартную ошибку среднего. Соответст
вие закона
распределения нормальному устанавливали с помощью λ
критерия Колмогорова
Смирнова.
Статистическую достоверность отличия измеряемых величин
определяли, используя
критерий Стьюдента. В случаях, когда распределение
измеряемых параметров не соотве
тствовало нормальному, вычисляли критерий
Манна
Уитни для непарных сравнений и критерий Уилкоксона
для парных. Для
определения связи признаков использовали коэффициент корреляции Спирмена
Различия считали статистически достоверными при значениях
Основные результаты исследования
Оценка оксидантной активности ПМЛ у больных с непереносимостью НПВП
разных клинических групп
Большую клиническую группу больных с непереносимостью НПВП
составляют больные с
. Известно, что у данных больных выявляются
рецидивирующие инфекции различной этиологии и локализации, чаще отмечаются
обострения инфекционного процесса (Бондарева Г.П., 2009), что может
свидетельствовать о том, что у этих лиц имеется недостаточность в
неспецифических или иммунных защитных механизмах, возможно,
недостаточность фагоцитарного звена иммунитета. Поэтому в первой серии
опытов мы определяли суммарную продукцию АФК ПМЛ цельной крови и
выделенных ПМЛ методом СЛХЛ у здоровых доноров и пациентов с
непереносимостью НПВП с разными клиническими проявлениями. 1 группу
пациентов составляли пациенты с АТ, 2 группу - пациенты с хронической
крапивницей/отеком Квинке, обостряющейся после приема НПВП (табл.1).
��19 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ;Таблица 1.
Светосумма СЛХЛ ПМЛ периферической крови здоровых доноров и больных с
непереносимостью Н
Исследуемые
группы лиц
Светосумма СЛХЛ ПМЛ
ПМЛ цельной крови
Выделенные ПМЛ
Доноры
232750,9 ± 23283,1
20005759,1±1200345,5
Группа 1
± 22307,5
16507651±990459,1
Группа 2
18025,4
19917131,3 ± 2600718,2
* - р<0,05 относительно аналогичного показателя у здоровых доноров
У пациентов с АТ (1 группа) наблюдается снижение светосуммы СЛХЛ
ПМЛ цельной крови (на 33,4%), выделенных ПМЛ (на 17,5%) по сравнению со
здоровыми донорами (
У пациентов с хронической
псевдоаллерг
ической
крапивницей
/отеком Квинке
(2 группа)
существенных изменений
светосуммы
ПМЛ
относительно
таковой
здоровых доноров не было выявлено.
Далее измеряли продукцию О
ПМЛ у этих же пациентов (табл.2).
Таблица 2
.
Светосумма СЛЦХЛ
ПМЛ периферической крови доноров и больных с
непереносимостью НПВП
Исследуемые
группы лиц
Светосумма СЛЦХЛ ПМЛ
ПМЛ цельной крови
Выделенные ПМЛ
Доноры
96803,1± 8586,6
± 92247
Группа
5343,4
± 58963
Группа 2
± 8601,5
-
р<0,05 относительно аналогичного показателя у здоровых доноров
У пациентов 1 группы наблюдается снижение светосуммы СЛЦХЛ ПМЛ
цельной крови (на 23%), выделенных ПМЛ (на 27%) по сравнению со здоровыми
донорами (
<0,05), что
косвенно свидетельствует об
угнетении
активности
НАДФН
оксидазы ПМЛ. У пациентов 2 группы существенных изменений
светосуммы
СЛЦХЛ ПМЛ
относительно таковой доноров
не было выявлено
��20 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ;Таким образом, суммарная продукция АФК ПМЛ периферической крови, в
том числе продукция О
различна у пациентов с непереносимостью НПВП
разных клинических групп. У пациентов с
выявляется снижение как суммарной
продукции АФК, так и продукции О
ПМЛ. У пациентов с хронической
псевдоаллергической крапивницей/отеком Квинке, обостряющейся после приема
НПВП, не обнаруживается существенных изменений продукции АФК ПМЛ по
сравнению со здоровыми донорами.
В следующей серии опытов определяли способность ПМЛ к праймингу у
пациентов с АТ и здоровых доноров. В качестве праймирующего агента
использовали комплексный антиген
Staphylococcus
aureus
(табл.3).
Таблица 3.
Влияние комплексного антигена
Staphylococcus
aureus
на про
дукцию АФК ПМЛ
здоровых
доноров
АГ,
микр.кл/мл,
ИП, отн.ед.
ПМЛ крови
Выделенные ПМЛ
± 0,27*
± 0,04
± 0,09*
± 0,09
± 0,05*
± 0,11*
± 0,04*
± 0,19*
± 0,24*
± 0,03*
0,12*
± 0,05*
± 0,14*
± 0,08*
± 0,16
± 0,08*
Примечание:* - р<0,05 относительно контроля
У здоровых доноров комплексный АГ
Staphylococcus
aureus
оказывает
праймирующее воздействие на суммарную продукцию АФК ПМЛ цельной крови и
суспензии ПМЛ, в том числе и продукцию
Увеличение продукции
ПМЛ
косвенно свидетельствует об увеличени
и активности НАДФН
оксидазы ПМЛ.
Исходя из полученных закономерностей влияния комплексного АГ
Staphylococcus
aureus
на продукцию АФК ПМЛ
здоровых
, нас
заинтересовало
в какой
мере они сохранятся у
пациентов
с АТ. С этой целью в
��21 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ;следующей серии опытов исследовали влияние комплексного
Staphylococcus
на продукцию АФК ПМЛ пациентов с АТ.
Поскольку предварительные
исследования показали существенные различия в продукции АФК ПМЛ под
воздействием
Staphylococcus
aureus
при наличии или отсутствии у пациентов
сенсибилизации
к стафилококковым энтерото
ксинам
, все пациенты с АТ были
разделены на 2
е группы: сенсибилизированные и несенсибилизированные
вышеупомянутыми АГ
(табл. 4
Следует отметить, что все пациенты находились в
стадии ремиссии основного заболевания.
Таблица 4.
Влияние комплексного антигена
Staphylococcus
aureus
на продукцию АФК ПМЛ
циентов с астматической триадой
ид
АГ,
микр.кл/
мл,
х10
Больные,
сенсибилизированные
стафилокококковыми
энтеротоксинам
Больные,
сенсибилизированные
стафилокококковыми
энтеротоксинам
ПМЛ крови
суспензии
ПМЛ крови
суспензии
СЛХЛ
СЛЦХЛ
Примечание: * - р<0,05 относительно контроля
# - р<0,05 относительно
аналогичной точки у здоровых доноров.
У пациентов, несенсибилизированных стафилококковыми энтеротоксинами,
наблюдается снижение суммарной продукции АФК, в том числе продукции О
ПМЛ цельной крови и выделенными ПМЛ по сравнению с донорами. Последнее
косвенно свидетельствует о снижении активности НАДФН-оксидазы ПМЛ
��22 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ;пациентов с АТ, возможно, связанное с нарушением сборки данного фермента в
процессе предстимуляции ПМЛ АГ
Staphylococcus
aureus
У пациентов с
, сенсибилизированных стафилококковыми
энтеротоксинами, прединкубация проб крови со специфическим аллергеном
Staphylococcus
aureus
сопровождается значительным увеличением продукции
АФК ПМЛ по сравнению
о здоровыми
донорами (
<0,05).
Активность НАДФН
оксидазы ПМЛ у этих больных снижена по
сравнению с таковой доноров (
0,05).
Выраженная стимуляция СЛХЛ цельной крови, по
видимому, происходит
вследствие
влияния
медиаторов, высвобождающихс
я из базофилов при
образовании
на их поверхнос
ти иммунного комплекса аллерген
, где в качестве
аллергена выступают энтеротокси
ны стафилококка
Существенные
различия
СЛХЛ крови больных с АТ, сенсибилизирова
нных
энтеротоксинами стафилоко
кка,
и здоровых доноров открываю
т возможность применения
метода
в к
ачестве
диагностического теста
для определения специфической сенсибилизации
организма к бактериальным аллергенам, в частности, к
Staphylococcus
aureus
В следующей серии опытов исследовали влияние НПВП (диклофенака натрия,
салицилата натрия и метамизола натрия) на СЛХЛ крови здоровых доноров и
пациентов с непереносимостью данных препаратов (рис.1). Исследуемые НПВП
оказывают дозозависимое модифицирующее влияние на СЛХЛ цельной крови. У
доноров малые концентрации препаратов стимулируют СЛХЛ крови, при
увеличении концентрации препаратов развивается угнетение СЛХЛ. У пациентов с
непереносимостью НПВП фаза стимуляции СЛХЛ крови отсутствует, а угнетение
СЛХЛ наступает при применении меньших концентраций препаратов и выражено
в большей степени, чем у доноров (
<0,05). Следует отме
тить, что у пациентов с
непереносимостью НПВП при отсутствии повышенной чу
вствительности к одному
из НПВП
показатели СЛХЛ крови при воздействии этого НПВП не имеют
достоверных отличий от аналогичных показателей
здоровых
доноров.
Определяли вклад НАДФН-оксидазы ПМЛ в развитие феномена
ингибирования СЛХЛ крови под влиянием НПВП у больных с их
непереносимостью методом СЛЦХЛ (рис.2
НПВП оказывают модифицирующее
влияние на СЛЦХЛ цельной крови.
��23 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ; &#x/MCI; 1 ;&#x/MCI; 1 ; а б в
Рисунок 1 (а,б,в).
Зависимость
СЛХЛ крови от концентрации диклофенака (а), салицилата (б), метамизола натрия
у доноров и
пациентов с непереносимостью НПВП.
Примечание: * -
р<0,05 отн.
контроля;
-
р<0,05 отн.
аналогичной точки у доноров.
а б в
Рисунок 2 (а,б,в).
Зависимость ИП СЛЦХЛ крови от концентрации диклофенака (а), салицилата (б), метамизола натрия (в) у доноров и
пациентов с непереносимостью НПВП.
Примечание: * - р<0,05 отн. контроля;
- р<0,05 отн. аналогичной точки у доноров
0

1

2

3

0,6

6

30

75

150

300

ИП СЛХЛ
Концентрация диклофенака, мкМ

Доноры

Больные с непереносимостью диклофенака

Больные без непереносимости диклофенака

0

0,5

1

1,5

2

0,06

0,3

1,5

3

6

12

ИП СЛХЛ
Концентрация салицилата натрия, мМ

Доноры

Больные с непереносимостью АСК

Больные без непереносимости АСК

0

0,5

1

1,5

0,6

6

30

150

300

600

ИП СЛХЛ
Концентрация метамизола натрия, мкМ

Доноры

Больные с непереносимостью метамизола натрия

Больные без непереносимости метамизола натрия

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

0,6

6

30

75

150

300

ИП СЛЦХЛ
Концентрация диклофенака, мкМ

Доноры

Больные с непереносимостью диклофенака

Больные без непереносимости диклофенака

0

0,5

1

1,5

2

2,5

0,06

0,3

1,5

3

6

12

ИП СЛЦХЛ
Концентрация салицилата натрия, мМ

Больные с непереносимостью АСК

Больные без непереносимости АСК

Доноры

0

0,5

1

1,5

2

0,6

6

30

150

300

600

1500

3000

ИП СЛЦХЛ
Концентрация метамизола натрия, мкМ

Доноры

Больные с непереносимостью метамизола натрия

Больные без непереносимости метамизола натрия

��24 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ;У пациентов с непереносимостью НПВП показатели СЛЦХЛ крови под
влиянием НПВП достоверно ниже таковых здоровых доноров, что косвенно
свидетельствует о снижении активности НАДФН-оксидазы ПМЛ.
пациентов с
непереносимостью НПВП при отсутствии повышенной чувствительности к
какому-либо НПВП показатели СЛЦХЛ крови при воздействии этого НПВП не
имеют достоверных отличий от таковых здоровых доноров.
Известно, что у больных с непереносимостью НПВП нередко возникают
побочные реакции на пищевые красители, в частности, тартразин, на который
могут развиваться как аллергические, так и псевдоаллергические реакции. В нашем
исследовании приняли участие пациенты с псевдоаллергическими реакциями на
тартразин. Для выяснения общих механизмов непереносимости псевдоаллергенов
и тартразина) определяли влияние тартразина на СЛХЛ крови здоровых
и больных с непереносимостью НПВП в сочетании и без такого с
непереносимостью данного пищевого красителя (рис.3).

а. б.
Рисунок 3 (а,б).
Зависимость ИП СЛХЛ (а) и СЛЦХЛ (б) крови от концентрации
разина у здоровых доноров и пациентов с непереносимостью НПВП в
сочетании и без такового с непереносимостью тартразина
Примечание:
* - р<0,05 относительно контроля;
# - р<0,05 относительно аналогичной точки у здоровых доноров.
0

0,5

1

1,5

0,4

4

20

100

500

1000

2000

ИП СЛХЛ
Концентрация тартразина, мкМ

Больные с непереносимостью тартразина

Больные без непереносимости тартразина

Здоровые доноры

0

0,5

1

1,5

0,4

4

20

100

500

1000

2000

ИП СЛЦХЛ
Концентрация тартразина, мкМ

Здоровые доноры

Больные без непереносимости тартразина

Больные с непереносимостью тартразина

��25 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ; &#x/MCI; 1 ;&#x/MCI; 1 ;Как видно из рисунка 3 (а), тартразин модифицирует СЛХЛ крови. У
здоровых доноров при воздействии на кровь тартразина выявляется две фазы
изменении СЛХЛ крови: в первой фазе отсутствуют выраженные изменения
СЛХЛ, вторая фаза характеризуется дозозависимым угнетением СЛХЛ. У больных
непереносимостью тартразина наблюдается выраженное подавление СЛХЛ крови,
уже начиная с минимальной концентрации красителя. При всех используемых
концентрациях тартразина СЛХЛ крови больных с непереносимостью тартразина
достоверно ниже, чем у здоровых доноров. При воздействии тартразина на кровь
больных с непереносимостью НПВП, не имеющих повышенной чувствительности
к тартразину, характер изменения светосуммы СЛХЛ крови аналогичен таковому
здоровых доноров.
Таким образом, влияние тартразина на СЛХЛ крови больных с
непереносимостью данного красителя является сходным с влиянием НПВП на
СЛХЛ крови больных с непереносимостью соответствующих препаратов. Это
может указывать на общность механизмов изменения СЛХЛ крови под влиянием
данных псевдоаллергенов, в частности, участии одних и тех же БАВ (медиаторов
цитокинов), изменяющих активность ферментов окислительного метаболизма
ПМЛ крови.
Указанные различия в показателях СЛХЛ крови здоровых доноров и
больных с непереносимостью тартразина открывают возможность применения
хемилюминесцентного теста для диагностики непереносимости данно
пищевого
красителя.
На следующем этапе исследований о
еделяли вклад НАДФН-оксидазы
ПМЛ в вызываемое тартразином подавление СЛХЛ крови методом СЛЦХЛ
(рис.3б). Прединкубация крови с тартразином не оказывает существенного влияния
на СЛЦХЛ крови и, следовательно, на активность НАДФН-оксидазы ПМЛ у всех
групп исследуемых лиц. Следовательно, НАДФН-оксидаза ПМЛ не участвует в
реализации эффекта подавления СЛХЛ крови под влиянием тартразина у всех
групп исследуемых лиц.
��26 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ;Определение роли плазменных факторов в развитии феномена
ингибирования СЛХЛ крови под влиянием псевдоаллергенов (НПВП,
тартразина) у больных с их непереносимостью
Оп
исанные выше эксперименты показали, что прединкубация образцов крови
с псевдоаллергенами (НПВП, тартразином) у больных с их непереносимостью
сопровождается дозозависимым ингибированием СЛХЛ крови. Между тем, до
настоящего времени не известно, связаны ли выявленные различия СЛХЛ крови под
воздействием псевдоаллергенов у доноров и больных с их непереносимостью
исключительно с влиянием на ПМЛ крови
плазмы (медиаторов, цитокинов),
или все же существуют какие-то особенности окислительного метаболизма ПМЛ
данной группы больных, проявляющиеся при воздействии на ПМЛ
псевдоаллергенов. Для решения этого вопроса исследовали СЛХЛ и СЛЦХЛ
выделенных из периферической крови ПМЛ после предварительной инкубации
суспензии ПМЛ с псевдоаллергенами у больных с их непереносимостью и здоровых
доноров (рис.4,5). Как следует из рис. 4, показатели СЛХЛ суспензии ПМЛ больных
с непереносимостью НПВП не имеют достоверных отличий от аналогичных
показателей здоровых доноров (p>0,1).
Показатели СЛЦХЛ суспензии ПМЛ
больных с непереносимостью НПВП (рис.5) также не имеют достоверных отличий
от аналогичных показателей здоровых доноров (р>0,1). Последнее косвенно
свидетельствует о том, что активность НАДФН-оксидазы выделенных ПМЛ
инкубированных с Н
изменяется сходным образом у здоровых доноров и у
больных с непереносимостью данных препаратов.
Мы также и
сследовали влияние тартразина на СЛХЛ и СЛЦХЛ выделенных
(рис.6). Показатели СЛХЛ и СЛЦХЛ суспензии ПМЛ больных с
непереносимостью тартразина не имеют достоверных отличий от аналогичных
показателей здоровых доноров (p>0,1).
Таким образом, полученные результаты свидетельствуют об отсутствии
каких-либо особенностей в функционировании ферментов окислительного
метаболизма ПМЛ под влиянием псевдоаллергенов у больных с их
непереносимостью по сравнению со здоровыми донорами.
��27 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ; &#x/MCI; 1 ;&#x/MCI; 1 ; а б
Рисунок 4 (а,б,в).
Влияние салицилата (а), метамизола (б) и диклофенака натрия (в) на ИП СЛХЛ суспензии ПМЛ
периферической крови доноров и больных с непереносимостью НПВП.
Примечание: * -
относительно контроля

б в
Рисунок 5 (а,б,в).
Влияние салицилата (а), метамизола (б) и диклофенака натрия (в) на ИП СЛЦХЛ суспензии ПМЛ
периферической крови доноров и больных с непереносимостью НПВП.
Примечание: * -
<0,05 относительно контроля
0

0,5

1

1,5

0,06

0,3

1,5

3

6

12

ИП СЛХЛ
Концентрация салицилата натрия, мМ

Доноры
Больные с непереносимостью АСК
0

0,5

1

1,5

0,6

6

30

150

300

600

ИП СЛХЛ
Концентрация метамизола натрия, мкМ

Доноры
Больные с непереносимостью метамизола натрия
0

0,5

1

1,5

0,6

6

30

75

150

300

ИП СЛХЛ
Концентрация диклофенака натрия, мкМ

Доноры
Больные с непереносимостью диклофенака
0

0,5

1

1,5

0,06

0,3

1,5

3

6

12

ИП СЛЦХЛ
Концентрация салицилата натрия, мМ

Больные с непереносимостью АСК

Доноры

0

0,5

1

1,5

2

0,6

6

30

150

300

600

ИП СЛЦХЛ
Концентрация метамизола натрия, мкМ

Доноры
Больные с непереносимостью метамизола натрия
0

0,5

1

1,5

0,6

6

30

75

150

300

ИП СЛЦХЛ
Концентрация диклофенака натрия, мкМ

Доноры
Больные с непереносимостью диклофенака
��28 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ; &#x/MCI; 1 ;&#x/MCI; 1 ; а б
Рисунок 6 (а,б).
Влияние тартразина на ИП СЛХЛ (а) и ИП СЛЦХЛ (б) суспензии
Л периферической крови здоровых доноров и больных с непереносимостью
тартразина.
Примечание:* -
<0,05 относительно контроля
Из этого следует, что различия в показателях СЛХЛ цельной крови данных
больных по сравнению с донорами при прединкубации проб крови с
псевдоаллергенами связаны с влиянием на ферменты окислительного метаболизма
ПМЛ находящихся в плазме крови
(медиаторов, цитокинов), содержание и
соотношение которых, по данным литературы, различно у здоровых доноров и
больных с непереносимостью псевдоаллергенов.
Для того, чтобы подтвердить, что именно плазменные факторы изменяют
реакцию ПМЛ крови на НПВП у больных с их непереносимостью, мы исследовали
влияние плазмы больных с непереносимостью
на окислительный метаболизм
ПМЛ здоровых доноров. Определяли светосумму СЛХЛ суспензии ПМЛ (рис.7).
Плазма больных с непереносимостью
оказывает ингибирующее воздействие
на СЛХЛ суспензии ПМЛ здоровых доноров. Причем данный эффект более
выражен, если плазма была отобрана из проб крови больных, предварительно
инкубированных с салицилатом натрия (3,0 мМ). Следовательно, плазма больных с
неперенос
имостью НПВП содержит базальный уровень БАВ (медиаторов,
цитокинов), оказывающих ингибирующее действие на суммарную продукцию
АФК ПМЛ.
0

0,5

1

1,5

2

0,4

4

20

100

500

1000

2000

ИП СЛХЛ
Концентрация тартразина, мкМ

Доноры

Больные с непереносимостью тартразина

0

0,5

1

1,5

2

0,4

4

20

100

500

1000

2000

ИП СЛЦХЛ
Концентрация тартразина, мкМ

Доноры

Больные с непереносимостью тартразина

��29 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ; &#x/MCI; 1 ;&#x/MCI; 1 ;Рисунок 7.
Влияние плазмы здоровых доноров и больных с непереносимостью
ацетилсалициловой кислоты на светосумму СЛХЛ суспензии ПМЛ доноров.

Примечание: * - р<0,05 относительно 1-го столбца; # - р<0,05 относительно 2-
го столбца;
р<0,05 относительно 3-го столбца.
1. Светосумма СЛХЛ ПМЛ доноров, инкубированных с плазмой, отобранной из проб
крови доноров после предварительной инкубации крови с физиологическим раствором.
2. Светосумма СЛХЛ ПМЛ доноров, инкубированных с плазмой, отобранной из проб
крови доноров после предварительной инкубации крови с салицилатом натрия (3,0 мМ).
3. Светосумма СЛХЛ ПМЛ доноров, инкубированных с плазмой, отобранной из проб
крови больных с непереносимостью АСК после предварительной инкубации крови с
физиологическим раствором.
4. Светосумма СЛХЛ ПМЛ доноров, инкубированных с плазмой, отобранной из проб
крови больных с непереносимостью АСК после предварительной инкубации крови с
салицилатом натрия (3,0 мМ).
Воздействие салицилата натрия на кровь больных с непереносимостью АСК
сопровождается изменением соотношения
в крови таким образом, ч
приводит к еще большему подавлению активности ферментов окислительного
метаболизма ПМЛ и, следовательно, суммарной продукции АФК ПМЛ.
Исходя из вышесказанного, в
следующей серии опытов определяли участие
клеточных
медиаторов в развитии феномена ингибирования СЛХЛ крови под
влиянием псевдоаллергенов (НПВП, тартразина) у пациентов с их
непереносимостью. С этой целью исследовали влияние блокаторов гистаминовых,
серотониновых,
лейкотриеновых
рецепторов и стабилизато
ра ме
мбран
0

5000000

10000000

15000000

20000000

25000000

30000000

35000000

1

2

3

4

30


базофилов и тучных клеток
на изменение СЛХЛ крови под влиянием
псевдоаллергенов
у больных с их непереносимостью. Все пациенты были
разделены на две группы: 1 группа включала пациентов непереносимостью
псевдоаллергенов, проявляющейся реакциями со
стороны органов дыхания
(бронхоспазм/ринит), 2
группа
реакциями со стороны кожных покровов
(крапивница/отек Квинке).
Результаты представлены
на рис.
и в табл.
Из рис. 8
следует
, что у пациентов с непереносимостью
существенный вклад в развитие
вызываемого салицилатом натрия
ингибирования СЛХЛ крови вносят
и Н2
гистаминовые
лейкотриеновые
цисЛТ1
рецепторы
Следует отметить, что
вклад гистаминовых рецепторов более выражен у пациентов 1 группы
в то вре
мя,
как вклад
цисЛТ1
равнозначен в обеих группах данных пациентов.
Серотониновые 5
НТ2 рецепторы, расположенные на тромбоцитах,
участвуют в
развитии указанного феномена только у пациентов 2 группы, что свидетельствует
том,
что механизм серотонин
опосредованной активации и дегрануляции
тромбоцитов реализуется только у пациентов с
кожными проявлениями
непереносимости.
По влиянию КГК
можно заключить, что в реализации
подавления СЛХЛ крови
воздействием салицилата натрия
у больных с
непереносимостью АСК
в определенной мере
участвуют медиаторы базофилов.
Аналогичные эксперименты были проведены для пациентов с непереносимостью
метамизола натрия, диклофенака натрия, тартразина (табл.5).
Мы обобщили данные о влиянии
блокаторо
в рецепторов и
КГК
на
вызываемое псевдоаллергенами угнетение СЛХЛ крови у больных с их
непереносимостью разных клинических групп
Эффекты блокаторов гистаминовых, серотониновых,
-лейкотриеновых
рецепторов и кромоглициевой кислоты на вызываемое НПВП и тартразином
угнетение СЛХЛ крови у больных с непереносимостью данных псевдоаллергенов:
Сильный эффект
(ИП больных не имеет достоверных отличий от ИП здоровых
доноров) оказывали: клемастин у пациентов с непереносимостью
1 группы и
у пациентов с непереносимостью тартразина 1 и 2 групп; ранитидин у пациентов с
непереносимостью АСК 1 группы; зафирлукаст у пациентов с непереносимостью
тартразина 1 и 2 групп; КГК у пациентов с непереносимостью тартразина 1 и 2
групп и пациентов с непереносимостью диклофенака 2 группы. Следует отметить,
что кетансерин не оказывал сильного эффекта ни в одной из групп пациентов.
��31 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ; &#x/MCI; 1 ;&#x/MCI; 1 ;а. б.
Рисунок 8
Влияние клемастина, ранитидина, кетансерина, зафирлукаста и
КГК на изменение СЛХЛ крови под воздействием салицилата натрия у пациентов с
непереносимостью АСК, имеющих реакции со стороны органов дыхания (группа 1)
и со стороны кожных покровов (группа 2).

Примечан
ие: *- р <0,05 относительно ИП больных с непереносимостью
;
# - р <0,05 относительно ИП доноров.
1. Отношение СЛХЛ проб, инкубированных с клемастином (1ЭСТД) и салицилатом
натрия (3мМ), к СЛХЛ проб, инкубированных с клемастином
2. Отношение СЛХЛ проб, инкубированных с ранитидином (1ЭСТД) и салицилатом
натрия (3мМ), к СЛХЛ проб, инкубированных с ранитидином;
3. Отношение СЛХЛ проб, инкубированных с кетансерином (1ЭСТД) и салицилатом
натрия (3мМ), к СЛХЛ проб, инкубированных с кетансерином;
. Отношение СЛХЛ проб, инкубированных с зафирлукастом (1ЭСТД) и салицилатом
натрия (3мМ), к СЛХЛ проб, инкубированных с зафирлукастом;
5. Отн
ошение СЛХЛ проб, инкубированных с КГК (1ЭСТД) и салицилатом натрия (3мМ),
к СЛХЛ проб, инкубированных с КГК
6. Отношение СЛХЛ проб, инкубированных салицилатом натрия (3мМ), к СЛХЛ проб,
инкубированных с физиологическим раствором у пациентов с непереносимостью АСК
или 2 группы.
7. Отношение СЛХЛ проб, инкубированных с салицилатом натрия (3мМ), к СЛХЛ проб,
инкубированных с физиологическим раствором у здоровых доноров.

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1,4

1

2

3

4

5

6

7

ИП, отн.ед.
Группа 1
0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1,4

1

2

3

4

5

6

7

ИП, отн.ед.
Группа 2
��32 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ;Таблица 5.
Влияние блокаторов рецепторов и КГК на изменение СЛХЛ крови под воздействием псевдоаллергенов у пациентов с их
непереносимостью, имеющих реакции со стороны органов дыхания (группа 1) или со стороны кожных покровов (группа 2).
Примечание:
-
р <0,05 относительно ИП больных с непереносимостью НПВП, тартразина; # - р <0,05 относительно ИП доноров.
Тестируемые
соединения

Пациенты с непереносимостью
метамизола
натрия
(группа 1)
Пациенты с непереносимостью
метамизола
натрия
(группа 2)
Доноры
Метамизол натрия (
6мкМ
0,71±0,03
0,69±0,05
1,17±0,08
Метамизол натрия + клемастин (1ЭСТД)

0,92±0,05*
0,83±0,04*

Метамизол натрия+ ранитидин (1ЭСТД)

0,82±0,02
Метамизол натрия+ кетансерин (1ЭСТД)

0,93±0,07*
0,90±0,03*
Метамизол натрия+зафирлукаст
(1ЭСТД)

0,94±0,06*
0,85±0,02*
Метамизол натрия+
КГК
(1ЭСТД)

0,87±0,06*
0,92±0,05*
Тестируемые
соединения

Пациенты с непереносимостью
диклофенака натрия (группа 1)
Пациенты с непереносимостью
диклофенака натрия (группа 2)
Доноры

Диклофенак натрия
6мкМ

0,87±0,04
0,84±0,06
0,17
Диклофенак натрия + клемастин (1ЭСТД)

1,24±0,04*
1,02±0,04*

Диклофенак натрия + ранитидин (1ЭСТД)

1,03±0,06
1,26±0,08
Диклофенак натрия+ кетансерин (1ЭСТД)

1,04±0,07*
1,25±0,09*
Диклофенак
+зафирлукаст (1ЭСТД)

1,12±0,08*
1,18±0,09*
Диклофенак натрия +
КГК
(1ЭСТД)

1,0±0,04*
1,39±0,13*
Тестируемые
соединения

Пациенты с непереносимостью
тартразина (1 группа)
Пациенты с непереносимостью
тартразина (1 группа)
Доноры

Тартразин
4мкМ

0,53±0,05
0,57±0,04
1,00±0,08
Тартразин + клемастин (1ЭСТД)

0,87±0,06*
0,91±0,04*

Тартразин + ранитидин (1ЭСТД)

0,75±0,04
0,81±0,04
Тартразин + кетансерин (1ЭСТД)

0,70±0,06*
2±0,03
Тартразин +зафирлукаст (1ЭСТД)

0,92±0,05*
0,95±0,04*
Тартразин +
КГК
(1ЭСТД)

0,88±0,07*
0,94±0,06*
��33 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ;Умеренный эффект
(ИП больных достоверно меньше ИП здоровых доноров
на 15-30%) оказывали: клемастин у пациентов с непереносимостью
2 группы,
пациентов с непереносимостью метамизола натрия 1 и 2 групп, пациентов с
непереносимостью диклофенака натрия 1 группы; ранитидин у пациентов
непереносимостью АСК 2 группы, пациентов с непереносимостью метамизола
натрия 1 и 2 групп, пациентов с непереносимостью тартразина 1 и 2 групп,
пациентов с непереносимостью диклофенака 2 группы
кетансерин у пациентов
непереносимостью АСК 2 группы, пациентов с непереносимостью метамизола
натрия 1 и 2 групп, пациентов с непереносимостью тартразина 1 и 2 групп,
пациентов с непереносимостью диклофенака натрия 2 группы
зафирлукаст у
пациентов с непереносимостью АСК 1 и 2 групп, пациентов с непереносимостью
метамизола натрия 1 и 2 групп; КГК
пациентов с непереносимостью
1 и 2
групп, пациентов с непереносимостью метамизола натрия 1 и 2 групп.
Слабый эффект
(ИП больных достоверно меньше ИП здоровых доноров на
35-45%) оказывали: клемастин у пациентов с непереносимостью диклофенака
натрия 2 группы; ранитидин у пациентов с непереносимостью диклофенака натрия
1 группы
кетансерин у пациентов с непереносимостью диклофенака натрия 1
группы
зафирлукаст у пациентов с непереносимостью диклофенака натрия 1 и 2
групп; КГК у пациентов с непереносимостью диклофенака натрия 1 группы.
Отсутствие эффекта
выявлено у кетансерина для пациентов с
непереносимостью АСК 1 группы.
Таким образом, эффекты клемастина, ранитидина, кетансерина,
зафирлукаста и КГК различны у пациентов с непереносимостью псевдоаллергенов
различной химической природы, имеющих различные клинические проявления.
есть вклад Н1- и Н2- гистаминовых, 5-НТ2 серотониновых и цисЛТ1
рецепторов
в развитии феномена ингибирования СЛХЛ крови под воздействием
псевдоаллергенов зависит от клинических проявлений непереносимости и
химической природы псевдоаллергенов.
Выше мы показали, что в реализации феномена ингибирования СЛХЛ крови
под влиянием НПВП и тартразина участвуют плазменные факторы. Было
установлено, что существенный вклад в вызываемое НПВП, тартразином
��34 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ;угнетение СЛХЛ крови вносят клеточные медиаторы. Вместе с тем нас
заинтересовал вопрос об участии цитокинов в реализации данного феномена.
определяли концентрации цитокинов в плазме крови
здоровых доноров
пациентов с непереносимостью НПВП, тартразина, проявляющейся реакциями со
стороны орга
нов дыхания (бронхоспазм/ринит)
группа
1 и со стороны кожных
покровов (крапивница/отек Квинке)
группа 2 (табл.
Таблица
Уровень цитокинов в плазме крови пациентов с непереносимостью НПВП,
тартразина и здоровых доноров
цитокина
Концентрация цитокинов, пг/мл
Здоровые доноры
Больн
ые
с непереносимостью НПВП,
тартразина
Группа 1
Группа 2
12,1±0,7*
25,9±3,6*
Примечание: *-
<0,05 относительно здоровых доноров
.
онцентрации ИЛ
4, ИФН
γ в плазме находятся в
диапазоне нормальных
значений у всех исследуемых групп ли
ц. Концентрация ИЛ
1β, ИЛ
8 и
α в
плазме умеренно повышена у пациентов 1 группы. У пациентов 2 группы и
здоровых доноров концентрации указанных провоспалительных цитокинов
находятся в пределах
нормальных значений.
Повышение концентрации
провоспалительных цитокинов в плазме крови пациентов 1 группы может быть
связано с наличием хронического воспалительного процесса в слизистой оболочке
бронхов. Умеренное повышение уровня провоспалительных
цитоки
нов у данных
пациентов, вероятно, связано с тем, что пациенты находились в
периоде ремиссии
хронического бронхита
и астмы.
У пациентов 2 группы и здоровых доноров в силу
отсутствия воспалительного процесса в организме концентрации
35


провоспалительных
цитокинов находятся в пределах нормы.
Выявляемый низкий
уровень противовоспалительного цитокина ИЛ
4 в группах пациентов
непереносимостью НПВП и здоровых доноров
косвенно
указывает на отсутствие
активации Т
хелперов 2
го типа
у большинства исследуемых ли
Для того, чтобы определить участие цитокиновых механизмов в реализации
феномена ингибирования СЛХЛ крови под воздействием псевдоаллергенов
(НПВП, тартразина), мы измеряли концентрации различных цитокинов в пробах
плазмы, полученных после прединкубации образцов крови с псевдоаллергенами
(табл. 7). У здоровых доноров концентрации цитокинов в плазме после
прединкубации проб крови с псевдоаллергенами не имели достоверных отличий от
таковых в контрольных пробах, не содержащих псевдоаллергены
.
Прединкубация образцов крови больных с салицилатом натрия, метамизолом
натрия и тартразином сопровождалась тенденцией к увеличению уровня цитокинов
в плазме крови обеих групп пациентов, особенно выраженной во 2 группе.
Последнее, вероятно, связано с большей чувствительностью клеток (базофилов и
др.) к действию псевдоаллергенов у пациентов 2 группы. Диклофенак натрия не
оказывал существенного влияния на выброс исследуемых цитокинов из клеток,
что, вероятно, связано с меньшей чувствительностью клеток к его влиянию.
видимому, некоторое увеличение концентрации исследуемых цитокинов под
влиянием НПВП и тартразина в крови пациентов с их непереносимостью связано с
дегрануляцией базофилов под воздействием указанных псевдоаллергенов, что
сопровождается высвобождением из базофилов не только медиаторов, но и
цитокинов. Однако мы не можем исключать, что помимо базофилов и другие
лейкоциты могут высвобождать цитокины под влиянием псевдоаллергенов
Показано увеличение
хемотаксической активности ПМЛ больных с аспириновой
астмой и с аспирин
чувствительной крапивницей после провокации аспирином, что
может с
опровождаться их дегрануляцией
Grzelewska
Rzymowska
Известно, что провоспалительные цитокины оказывают
праймирующее
влияние на продукцию фагоцитами АФК, что сопровождается увеличением ХЛ при
действии вторичных стимулов
Никанкина
с соавт., 1999
. Поэтому
достоверное
увеличение
уровня
провоспалительных
цитокинов ФНО
α и ИФН
��36 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ;Таблица 7.
Уровень цитокинов в плазме крови после прединкубации проб крови с
псевдоаллергенами (НПВП, тартразином) у здоровых доноров и у пациентов с их
непереносимостью, имеющих реакции со стороны органов дыхания (группа 1) или
со стороны кожных покровов (группа 2)
Примечание: *-
<0,05 относительно контроля
Тестируемые
соединения
Концентрация цитокинов, пг/мл
Здоровые доноры
Физиологический
раствор
(контроль)
Салицилат натрия
Метамизол
натрия
Диклофенак
натрия
Тартразин
Пациенты с реакциями
со стороны органов дыхания (группа 1)
Физиологический
раствор
(контроль)
Салицилат натрия
Метамизол
натрия
Диклофенак
натрия
Тартразин
Пациенты с реакциями со стороны кожных покровов (группа 2)
Физиологический
раствор
(контроль)
Салицилат
натрия
±0,04
Метамизол
натрия
±0,05
Диклофенак
натрия
±0,05
Тартразин
±0,04
37


под влиянием псевдоаллергенов не вносит вклад в реализацию феномена
ингибирования СЛХЛ крови
у данных больных. Вместе с тем
у пациентов 2 группы
под влиянием салицилата
, метамизола натрия и тартразина
происходит
достоверное увеличение уровня противовоспалительного цитокина ИЛ
4,
ингибирующего ХЛ фагоцитов, что может вносить вклад в развитие феномена
ингибирования СЛХЛ крови, вызываемого псевдоаллергенами. Однако учитывая
низкую концентрацию ИЛ
4 в крови
данных пациентов, вклад ИЛ
4 в реализацию
указанного феномена незначительный.
Таким образом, осно
вной вклад в развитие
ингибирования СЛХЛ крови под влиянием псевдоаллергенов у
пациентов с их непереносимост
ью вносят медиаторные механизмы.
ение вклада индуцибельной
синтазы фагоцитов периферической
крови в развитие
феномена
ингибирования
СЛХЛ
крови под влиянием
НПВП
у больных с астматической триадой
Многочисленными исследованиями установлено, что у больных
выдыхаемом воздухе выявляется значительное повышение содержания NO по
сравнению с таковым у здоровых людей
Лев
Цыпленкова
С.Э. с соавт.,
. Причем показан более высокий уровень активности
в эпителии
носовых полипов у пациентов с АТ
по сравнению с таковым у пациентов с
полипозом носа и БА без непереносимости
Parikh
. с соавт, 2002
Между
тем, до настоящего времени не известно,
существует ли зависимость между
степенью подавления СЛХЛ крови
под влиянием НПВП
у больных с АТ и уровнем
активности
фагоцитов. Для получения ответа на данный вопрос в
следующей
серии опытов
исследовали влияние
блокатора
iNOS
LNNA
на вызываемое НПВП
угнетение СЛХЛ крови у больных с АТ
(табл.
в значительной степени
снимает вызываемое НПВП угнетение СЛХЛ крови у пациентов с АТ, при этом
наибольший эффект наблюда
ся при высоких концентрациях
Уменьшение
ингибирующего действия НПВП на СЛХЛ крови под влиянием
LNNA
может
происходить в силу
следующих причин: во
первых, снижением образования
который подавляет активность
НАДФН
оксидазы ПМЛ,
эффективно
взаимодействует с
, в результате чего снижается продукция Н
и ОН
; во
вторых, возможным участием iNOS фагоцитов в механизмах
угнетения СЛХЛ
крови под влиянием НПВП у больных с АТ.
��38 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ;Таблица 8.
Влияние
нитро
аргинина в смеси с салицилатом
натрия
или метамизолом
натрия
СЛХЛ
крови
больных с астматической триадой
Концентрации исследуемых
соединений
СЛХЛ
нитро
аргинин (22,8мкМ) + салицилат натрия
3 мМ
±0,10
нитро
аргинин (11,4мкМ) + салицилат натрия
3 мМ
±0,07*
нитро
аргинин (2,3мкМ) + салицилат натрия
3 мМ
±0,06*
нитро
аргинин (0,46мкМ) + салицилат натрия
3 мМ
±0,09*
нитро
аргинин (0,05мкМ) + салицилат натрия
3 мМ
±0,04*
нитро
аргинин (0,02мкМ) + салицилат натрия
3 мМ
±0,03*
Салицилат натрия
3 мМ
±0,05
нитро
аргинин (22,8мкМ) +
метамизол натрия
6мк
±0,13
нитро
аргинин (11,4мкМ) +
метамизол натрия
6мк
±0,06*
нитро
аргинин (2,3мкМ) +
метамизол натрия
6мк
±0,09*
нитро
аргинин (0,46мкМ) +
метамизол натрия
6мк
±0,06*
нитро
аргинин (0,05мкМ) +
метамизол натрия
6мк
±0,05*
нитро
аргинин (0,02мкМ) +
метамизол натрия
6мк
±0,01*
Метамизол натрия
6мк
±0,03
Примечание: *-
р<0,05 относительно показателей СЛХЛ проб крови с салицилатом или
метамизолом натрия.
Для выяснения этого вопроса определяли активность iNOS лейкоцитов
периферической крови у больных БА и здоровых доноров при воздействии на
культуру лейкоцитов НПВП (табл.9).
Об активности iNOS лейкоцитов косвенно
судили по уровню конечных стабильных продуктов NO в пробах. У всех пациентов
с АТ уровень нитритов был достоверно выше такового здоровых доноров, причем
фазу обострения хронического бронхита уровень нитритов был выше, чем в фазу
ремиссии. Кроме того, инкубация суспензии лейкоцитов с НПВП сопровождалась
тенденцией к снижению уровня нитритов у всех исследуемых групп лиц. Причем
степень подавления продукции
фагоцитами под
влиянием
НПВП существенно
не различалась у всех исследуемых групп лиц.
Из полученных данных можно сделать вывод, что уровень активности iNOS
фагоцитов изменяется сходным образом под влиянием НПВП у здоровых доноров
и у всех пациентов с БА вне зависимости от фазы течения заболевания и наличия
непереносимости НПВП
��39 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ;Таблица 9.
Влияние салицилата натрия, метамизола натрия и диклофенака натрия на уровень
стабильных конечных продуктов
у пациентов с бронхиа
льной астмой и
здоровых доноров
Примечание
-
р<0,05 относительно показателей здоровых доноров.
Уч
итывая, что активность
iNOS
фагоцитов выше у пациентов с обострением
хронического бронхита по сравнению с таковыми в ремиссии, мы посчитали
целесообразным сравнить показатели
крови
у пациентов с АТ в фазу
обострения и ремисси
и хронического бронхита и астмы (табл.10)
ица
10.
Зависимость между степенью подавления СЛХЛ крови под влиянием НПВП и
ой теч
ения хронического бронхита у пациентов с астматической триадой
Примечание
*- р<0,05 относительно показателей здоровых доноров.
Показатели ИП СЛХЛ крови
пациентов с АТ в фазу обострения
хронического бронхита и астмы не имеют достоверных различий по сравнению с
таковыми у пациентов, находящихся в фазе ремиссии. Таким образом, степень
Препарат
Здоровые
Атопическая
БА в фазу
АТ в фазу
АТ в фазу
обострения
Контроль
(без НПВП)
±6,38
±11,74
±10,41
±14,61
Салицилат
натрия
±5,82
(↓ на 19% отн.
контроля)
±7,59
(↓ на 21% отн.
контроля)
±13,55
(↓ на 20% отн.
контроля)
±13,41
(↓ на 18% отн.
контроля)
Метамизол
±6,07
(↓
на 24% отн.
контроля)
±9,04
(↓ на 23% отн.
контроля)
±8,12
(↓ на 22% отн.
контроля)
(↓ на 20% отн.
контроля)
Диклофенак
±5,89
(↓
18% отн.
контроля)
±8,55
(↓ на 19% отн.
контроля)
±9,72
(↓ на 17% отн.
контроля)
±10,91
(↓ на 16% отн.
контроля)
СЛХЛ
, отн. ед.
Фаза обострения
хронического бронхита
Фаза ремиссии
хронического
бронхита и астмы
Здоровые
Салицилат натрия
±0,05
±0,05
±0,09
Метамизол натрия
±0,03
±0,04
±0,08
Диклофенак натрия
±0,05
±0,03
±0,17
��40 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ;подавления СЛХЛ крови под влиянием НПВП у пациентов с АТ не зависит от фазы
течения воспалительного процесса в бронхах и, следовательно, от уровня
активности
iNOS
фагоцитов.
Определение зависимости между степенью подавления СЛХЛ крови под
влиянием НПВП, тартразина и давностью существования непереносимости
данных псевдоаллергенов
Определяли зависимость между степенью подавления СЛХЛ крови под
влиянием псевдоаллергенов и давностью возникновения их непереносимости в
разных клинических группах пациентов (табл. 11, 12). У пациентов с
бронхиальными проявлениями непереносимости псевдоаллергенов (табл. 11)
степень снижения показателей
СЛХЛ крови возрастает при увеличении
давности существования указанной непереносимости. У пациентов с кожными
проявлениями непереносимости псевдоаллергенов (табл. 12), напротив, степень
снижения показателей
СЛХЛ крови уменьшается при увеличении давности
возникновения непереносимости данных псевдоаллергенов.
Таблица 11.
Зависимость между степенью подавления СЛХЛ крови под влиянием НПВП,
тартраз
ина и давностью возникновения непереносимости данных псевдоаллергенов
у пациентов с реакциями на псевдоаллергены со стороны органов дыхания
СЛХЛ, отн.ед.
Больные с непереносимостью НПВП, тартразина
(с реакциями со стороны
органов дыхания)
Доноры
Продолжительность непереносимости НПВП, тартразина
Более 10 лет
Салицилат
Метамизол
Диклофенак
Тартразин
Примечание. *- р<0,05 относительно показателей здоровых доноров

��41 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ;Таблица 12
Зависимость между степенью подавления СЛХЛ крови под влиянием НПВП,
тартраз
ина и давностью возникновения непереносимости данных псевдоаллергенов
у пациентов с реакциями на псевдоаллергены со стороны кожных покровов
СЛХЛ, отн.ед.
Больные с непереносимостью НПВП, тартразина
(с реакциями со стороны кожных покровов)
Доноры
Продолжительность непереносимости НПВП, тартразина
Более 10 лет
Салицилат
Метамизол
Диклофенак
Тартразин
Примечание. *- р<0,05 относительно показателей здоровых доноров.
Таким образом, степень подавления СЛХЛ крови под влиянием
псевдоаллергенов у пациентов с их непереносимостью зависит от времени,
прошедшего с момента возникновения данной непереносимости.
ВЫВОДЫ
1. Суммарная продукция АФК ПМЛ различна у пациентов с непереносимостью
НПВП разных клинических групп. У пациентов с астматической триадой снижена
суммарная продукция АФК выделенными ПМЛ на 18%, ПМЛ в составе цельной
крови – на 33% по сравнению со здоровыми донорами (
<0,05). У пациентов с
хронической псевдоаллергической крапивницей/отеком Квинке, обостряющейся
после приема НПВП, не о
бнаруживается существенных изменений суммарной
продукции АФК ПМЛ по сравнению со здоровыми донорами.
2. Продукция О
ПМЛ различна у пациентов с непереносимостью НПВП разных
клинических групп. У пациентов с астматической триадой снижена продукция О
выделенными ПМЛ на 27%, ПМЛ в составе цельной крови – на 23% по сравнению
со здоровыми донорами (
<0,05). У пациентов с хронической псевдоаллергической
крапивницей/отеком Квинке, обостряющейся после приема НПВП, не
42


обнаруживается существенных изменений продукции О
ПМЛ по сравнению со
здоровыми донорами.
3. Антигены
Staphylococcus
aureus
оказывают праймирующее влияние на
выработку АФК ПМЛ цельной крови и выделенными ПМЛ у здоровых доноров,
что связано с увеличением активности НАДФН
оксидазы ПМЛ. У пац
иентов с
астматическо
й триадой в стадии ремиссии, не
сенсибилизированных
стафилококковыми энтеротоксинами, наблюдается снижение праймирующего
влияния антигенов
Staphylococcus
aureus
на выработку АФК ПМЛ цельной крови
и выделенными ПМЛ по сравнению с донора
ми (
<0,05), что связано со
снижением активности НАДФН
оксидазы ПМЛ. У пациентов с астматической
триадой в стадии ремиссии, сенсибилизированных стафилококковыми
энтеротоксинами, прединкубация проб крови со специфическим аллергеном
Staphylococcus
aureus
сопровождается значительным увеличением продукции
АФК ПМЛ крови по сравнению со здоровыми донорами (
<0,05). Активность
НАДФН
оксидазы ПМЛ у этих больных снижена по сравнению с таковой
здоровых доноров (
4. НПВП оказывают дозозависимое модифицирующее влияние на СЛХЛ цельной
крови здоровых доноров и пациентов с непереносимостью данных препаратов. У
здоровых доноров малые концентрации препаратов стимулируют СЛХЛ крови, при
увеличении концентрации препаратов развивается угнетение СЛХЛ. У пациентов
непереносимостью НПВП фаза стимуляции СЛХЛ крови отсутствует, а угнетение
СЛХЛ наступает при применении меньших концентраций препаратов и выражено
в большей степени, чем у здоровых доноров (
5. Пищевой краситель тартразин модифицирует СЛХЛ крови здоровых доноров и
больных с непереносимостью НПВП в сочетании или без такого с
непереносимостью тартразина. У здоровых доноров при воздействии на кровь
тартразина выявляется две фазы в изменении СЛХЛ крови: в первой фазе
отсутствуют выраженные изменения СЛХЛ, во второй фазе наблюдается
дозозависимое угнетение СЛХЛ. У больных с непереносимостью тартразина
выявлено выраженное подавление СЛХЛ крови, начиная с минимальной
концентрации красителя. При всех используемых концентрациях тартразина СЛХЛ
крови больных с непереносимостью тартразина ниже, чем у здоровых доноров
��43 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ;6. Одним из механизмов ингибирования СЛХЛ крови под влиянием НПВП у
больных с непереносимостью данных препаратов является снижение активности
НАДФН-оксидазы ПМЛ относительно таковой здоровых доноров. Вместе с тем
НАДФН-оксидаза ПМЛ не вносит вклад в реализацию ингибирования СЛХЛ крови
под влиянием тартразина у пациентов с непереносимостью НПВП в сочетании с
непереносимостью тартразина.
7. Показатели СЛХЛ и СЛЦХЛ выделенных ПМЛ, инкубированных с
псевдоаллергенами (НПВП, тартразином), не имеют достоверных отличий (
доноров и больных с непереносимостью соответствующих псевдоаллергенов, что
свидетельствует об отсутствии каких
либо особенностей в ф
ункционировании
ферментов окислительного метаболизма ПМЛ под воздействием НПВП,
тартразина у больных с непереносимостью данных псевдоаллергенов по сравнению
с донорами.
8. Феномен подавления СЛХЛ крови под влиянием псевдоаллергенов (НПВП,
тартразина) у больных с их непереносимостью опосредуется участием медиаторов,
что подтверждается ослаблением или предотвращением развития указанного
феномена под воздействием клемастина, ранитидина, кетансерина, зафирлукаста и
кромоглициевой кислоты (
<0,05). Вклад Н1
гистаминовых, 5
НТ2
серотониновых и
цисЛТ1
рецепторов в развитие феномена ингибирования СЛХЛ
крови под воздействием НПВП и тартразина зависит от химической природы
псевдоаллергенов и от клинических проявлений непереносимости.
9. Провоспалительные цитокины ИЛ-1β, ИЛ-8, ФНО-α, ИФН-γ не вносят вклад в
подавление СЛХЛ крови под влиянием НПВП, тартразина (р>0,01).
Противовоспалительный цитокин ИЛ-4 вносит незначительный вклад в
реализацию феномена ингибирования СЛХЛ крови под влиянием НПВП,
тартразина у пациентов с кожными проявлениями непереносимости указанных
псевдоаллергенов (
<0,05
10. Активность индуцибельной
синтазы фагоцитов повышена у больных с
астматической триадой по сравнению с таковой у здоровых доноров и больных с
атопической бронхиал
ьной астмой без полипоза носа и непереносимости НПВП
<0,05). В стадию обострения хронического бронхита и астмы активность
индуцибельной
синтазы выше, чем в стадию ремиссии (
<0,05).
��44 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ;11. Степень подавления СЛХЛ крови под влиянием НПВП у пациентов с
тматической триадой не зависит от фазы течения воспалительного процесса в
бронхах и от уровня активности индуцибельной
синтазы
фагоцитов
>0,1).
12. Степень подавления СЛХЛ крови под влиянием НПВП и тартразина у
пациентов с их непереносимостью зависит от времени, прошедшего с момента
возникновения непереносимости данных псевдоаллергенов. У пациентов с
бронхиальными проявлениями непереносимости степень подавления СЛХЛ крови
возрастает при увеличении времени существования указанной непереносимости. У
пациентов только с кожными проявлениями непереносимости (крапивница/отек
Квинке) степень подавления СЛХЛ крови уменьшается при увеличении
длительности существования непереносимости НПВП, тартразина.
13. Обосновано применение хемилюминесцентного теста для диагностики
повышенной чувствительности к псевдоаллергенам (НПВП, пищевым красителям)
и персонифицированного подбора патогенетической терапии.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
Рекомендуем испо
льзовать метод стимулированной сульфатом бария люминол
зависимой хемилюминесценции крови для диагностики
повышенной
чувствительности к псевдоаллергенам (НПВП, тартразину) и
персонифицированного подбора патогенетической терапии.
Рекомендуем прим
енять метод стимулированной сульфатом бария люминол
зависимой хемилюминесценции крови для
диагностики
vitro
специфической
сенсибилизации организма к бактериальным аллергенам
Рекомендуем содержательную часть работы использовать в учебном процессе
изучении дисциплин: патологическая физиология
, клиническая патологическая
физиология
; общая патология; фармакология, клиническая фармакология.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.
Чаусова, С.В. Корреляция между тестом торможения эмиграции лейкоцитов в
полости рта и хемилюминесцентным тестом, применяемыми для диагностики
«аспириновой» бронхиальной астмы / Г.П. Бондарева, С.В. Чаусова //
Конгресс
по ЛОР болезням: мат.конгр.-Вильнюс, 2005.-
��45 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ;2. Чаусова, С.В. Сравнение результатов теста торможения эмиграции лейкоцитов
в полости рта и хемилюминесцентного теста, полученных при исследовании
больных с астматической триадой / С.В. Чаусова, Г.П. Бондарева, Ю.В. Балякин
и др. // ХІ
Российский национальный конгресс «Человек и Лекарство»:
мат.конгр.
М., 2007.
Чаусова, С.В. Вклад миелопероксидазной и НАД
-оксидазной ферментных
систем в изменение стимулированной люминол-зависимой
хемилюминесценции лейкоцитов крови больных с непереносимостью анальгина
и/или аспирина под действием анальгина и салицилата натрия / С.В. Чаусова,
В.И. Пыцкий, Ю.В. Балякин и др. // Научно-практическая конференция,
посвященная 45-летию МБФ «Медико-биологические науки для теоретической
и клинической медицины»: мат.конф. - М., 2008.- С.99.
усова, С.В.
Диагностика скрытой непереносимости аспирина
vitro
у больных с полипозным риносинуситом и больных с бронхиальной астмой в
сочетании с полипозным риносинуситом / С.В. Чаусова, Г.П. Бондарева,
Ю.В.
Балякин и др. //
Российский национальный конгресс «Человек и
Лекарство»: мат.конгр.
М., 2009.
С.296.
Чаусова, С.В. Прайминг полиморфноядерных лейкоцитов крови доноров,
индуцированный бактериальными суспензиями / Е.А. Усанова, С.В. Чаусова,
В. Балякин и др. //
Х Российский национальный конгресс «Человек и
Лекарство»: мат. конгр.
М., 2012.
С.588.
Чаусова, С.В.
Влияние комплексных бактериальных препаратов на оксидантные
функции полиморфно-ядерных лейкоцитов крови доноров / Е.А. Усанова,
С.В.
Чаусова, О.Ю. Филатов и др.
Вестник Российского государственного
мед
ицинского университета.
– 2012.-
Чаусова, С.В. Изменение активности НАДФН-оксидазной ферментной системы
полиморфно-ядерных лейкоцитов при воздействии диклофенака натрия на
кровь больных с непереносимостью диклофенака и здоровых доноров / С.В
Чаусова, Е.А. Усанова, Г.П. Бондарева и др. //
Российский национальный
конгресс «Человек и Лекарство»: мат. конгр.
М., 2014.
С.350
51.
Чаусова, С.В. Влияние диклофенака натрия на оксидантные функции
полиморфно-ядерных лейкоцитов периферической крови здоровых доноров и
больных с повышенной чувствительностью к диклофенаку / С.В Чаусова, Г.П.
��46 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ;Бондарева, Е.А. Усанова и др. //
Медицинский вестник Башкортостана
-С.73-76.
Чаусова, С.В. Определение повышенной чувствительности к пищевому
красителю тартразину хемилюминесцентным методом / С.В Чаусова, К.Г.
Гуревич, Г.П. Бондарева и др. // Научно-практическая конференция с
международным участием «Профилактика 2014»: мат. конф.-М., 2014.-С.17.
Чаусова, С.В. Влияние нестероидных противовоспалительных препаратов на
хемилюминесценцию полиморфно-ядерных лейкоцитов у пациентов с
непереносимостью данных препаратов / С.В Чаусова, К.Г. Гуревич, Е.А.
Усанова и др. //
Экспериментальная и клиническая фармакология
-2014.-
-31.
Чаусова, С.В. Возможность применения метода стимулированной сульфатом
бария люминол-зависимой хемилюминесценции крови для диагностики
повышенной чувствительности к диклофенаку натрия / С.В. Чаусова,
Г.П.
Бондарева,
Е.А.Усанова, А.Н. Синельникова //
Системный анализ и
управление в биомедицинских системах.
-2014.-Т.13,
-С.158-163.
Чаусова, С.В. Изменение функциональной активности полиморфно-ядерных
лейкоцитов периферической крови у больных с астматической триадой / С.В.
Чаусова, Г.П. Бондарева, Е.А. Усанова и др. //
Медицина критических
состояний
.-2014.-№2.-
.
Чаусова, С.В. Возможность применения метода стимулированной сульфатом
бария люминол-зависимой хемилюминесценции для диагностики
непереносимости пищевого красителя тартразина / С.В. Чаусова, Г.П.
Бондарева, К.Г. Гуревич и др. //
Кубанский научный медицинский вестник
-140.
Чаусова, С.В. Влияние пищевого красителя тартразина на хемилюминесценцию
полиморно-ядерных лейкоцитов периферической крови у пациентов с
непереносимостью тартразина / С.В. Чаусова, К.Г. Гуревич, Г.П. Бондарева и
др. //
Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье»
.-
-78.
Чаусова, С.В. Возможность диагностики непереносимости нестероидных
противовоспалительных препаратов по изменению хемилюминесцентного
свечения полиморфно-ядерных лейкоцитов периферической крови / С.В.
��47 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ;Чаусова, К.Г. Гуревич, Г.П. Бондарева и др. //
Патологическая физиология и
экспериментальная терапия.
-2014.-
-132.
Чаусова, С.В. ОТС анальгетики-антипиретики для приема внутрь: механизм
действия и профиль безопасности / Белоусов Ю.Б., Гуревич К.Г., Чаусова С.В. //
Лечащий врач
-2015.-
-С.79-82.
Чаусова, С.В. Степень ингибирования стимулированной сульфатом бария
люминол-зависимой хемилюминесценции крови под воздействием
нестероидных противовоспалительных препаратов, тартразина в зависимости от
давности возникновения непереносимости данных соединений / С.В. Чаусова,
Г. Гуревич, Г.П. Бондарева и др. //
Кубанский научный медицинский
вестник
-2015.-
-133.
Чаусова, С.В. Роль оксида азота в патогенезе непереносимости нестероидных
противовоспалительных препаратов у больных с астматической триадой /
Чаусова,
Г. Гуревич, С.В. Калиш и др. //
Курский научно-практический
вестник «Человек и его здоровье»
.-2015.-
-60.
Чаусова, С.В. Кислородозависимый метаболизм полиморфно-ядерных
лейкоцитов периферической крови пациентов с непереносимостью
нестероидных противовоспалительных препаратов / С.В. Чаусова, К.Г. Гуревич,
Г.П. Бондарева и др.//
Кубанский научный медицинский вестник
-2015.-
-132.
Чаусова, С.В. Роль клеточных медиаторов в развитии феномена ингибирования
стимулированной сульфатом бария люминол-зависимой хемилюминесценции
крови под влиянием нестероидных противовоспалительных препаратов у
пациентов с непереносимостью данных препаратов / С.В. Чаусова, К.Г.
Гуревич, Г.П. Бондарева и др. //
Патологическая физиология и
экспериментальная терапия.
-2015.-Т.59,
93.
Чаусова, С.В. Роль биологически активных веществ в развитии феномена
ингибирования стимулированной сульфатом бария люминол-зависимой
хемилюминесценции крови под влиянием
тартразина у пациентов с его
непереносимостью / С.В. Чаусова, К.Г. Гуревич, Г.П. Бондарева и др. //
Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье»
-2015.-
-62.
��48 &#x/MCI; 0 ;&#x/MCI; 0 ;22. Чаусова, С.В. Роль цитокинов в развитии феномена ингибирования
стимулированной сульфатом бария люминол-зависимой хемилюминесценции
крови под влиянием
нестероидных противовоспалительных препаратов у
пациентов с непереносимостью данных препаратов / С.В. Чаусова, К.Г.
Гуревич, Г.П. Бондарева и др. //
Цитокины и воспаление.-
2015.-Т.14,
19-23.
Чаусова, С.В. Вклад НАДФН-оксидазы полиморфно-ядерных лейкоцитов
периферической крови в развитие феномена ингибирования стимулированной
сульфатом бария люминол-зависимой хемилюминесценции крови под влиянием
севдоаллергенов у пациентов с их непереносимос
/
К.Г. Гуревич, С.В.
Чаусова, Г.П. Бондарева и др. //
Курский научно-практический вестник
«Человек и его здоровье».
-С.22-27.
Chausova, S.V. The role of cellular mediators in the development of the phenomenon
of ingibition barium sulfate indu
ced luminol
dependent chemiluminescence of blood
under the influence of pseudoallergenes in patiens with their intolerance / S.V.
Chausova, K.G. Gurevich, G.P. Bondareva, et al. // XIY International Conference
"High medical technologies of XXI century": c
onference proceedings.
Benidorm,
Spain, 2015.
Список сокращений
- астматическая триада
АФК - активные формы кислорода
- интерлейкин
ИФН-γ - интерферон гамма
- нестероидные противовоспалительные препараты
ПМЛ - полиморфно-ядерные лейкоциты
СЛХЛ- стимулированная сульфатом бария люминол-зависимая
хемилюминесценция
СЛЦХЛ - стимулированная люцигенин-зависимая хемилюминесценция
ФНО-
- фактор некроза опухоли альфа
- хемилюминесценция
Цис-ЛТ - цистеиниловые лейкотриены
рецепторы 1 типа к цистеиниловым лейкотриенам
индуцибельная
синтаза
нитро
аргинин

Приложенные файлы

  • pdf 14803930
    Размер файла: 780 kB Загрузок: 0

Добавить комментарий