хлороформ-метанол-вода (4:3,5:2). Метод обеспечил выход 11,4 мг эпимедокореанозида (27), 46,5 мг икариина (28) и 17,7 мг икаризида (29) из 200 мг пробы при одноступенчатом


Чтобы посмотреть этот PDF файл с форматированием и разметкой, скачайте его и откройте на своем компьютере.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ КЫРГЫЗСКОЙ
РЕСПУБЛИКИ


КЫРГЫЗСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ

имени И.К. АХУНБАЕВА


ИНСТИТУТ БИОТЕХНОЛОГИИ НАН КЫРГЫЗСКОЙ РЕСПУБЛИКИ


На правах рукописи

УДК
615.32:615.412.5:615
.45


ЖАНЫМХАНОВА ПЕРНЕШ ЖАЙДАРБЕКОВНА


ТЕ
ХНОЛОГИЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА
ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОГО ДЕЙСТВИЯ НА ОСНОВЕ ОКСИМА
ПИНОСТРОБИНА И ЕГО СТАНДАРТИЗАЦИЯ


1
4
.0
4
.01
-

т
ехнология
получения
лекарств



Диссертация


на соискание ученой степени

кандидата фармацевтических наук



Научны
й

руководител
ь
:

Ит
жанова Хорлан Искожиевна
,

ч
лен
-
корр
.

НАН РК
, д
октор

ф
арм
ацевтических наук
, п
роф
ессор
.





Бишкек
-

201
7



2

ОГЛАВЛЕНИЕ



стр.


НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ

4

ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
, ЕДИНИЦ И
Т
ЕРМИНОВ


5

ВВЕДЕНИЕ

6

1

ФЛАВОНОИДЫ


ПЕРСПЕКТИВНЫЕ ИСТОЧНИКИ
НОВЫХ
ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ


1
2

1.1

Лекарственные препараты на основе биологически активных
флавоноидов


12

1.2

Применение центробежной

хроматографи
и распределения

для
выделения и очистки флавоноидов

30

2

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

39

2.1

Материалы и
сследования

39

2.2

Методы исследования

41

3

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ СУБСТАНЦИИ
ПИНОСТРОБИНА И ЕЕ СТАНДАРТИЗАЦИЯ


45

3.1

Определение сырьевых запасов тополя бальзамического

45

3.2

Подбор оптимальных условий углекислотной экстракции
почек
тополя бальзамиче
ского

для количественного извлечения
пиностробина



45

3.3

Разработка нового способа выделения и очистки пиностробина из
СО
2
-
экстракта
почек тополя бальзамического

с применением
современных хроматографических методов



50

3.4

Разработка технологии субста
нции пиностробина с применением
центробежной хроматографии распределения


53

3.
4
.1

Подбор оптимальных условий выделения и очистки субстанции
пиностробина


53


3


3.
5.

3.6.

Спецификация качества субстанции пиностробина

Разработка опытно
-
промышленного регламе
нта получения
субстанции пиностробина

59


66

4

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ СУБСТАНЦИИ ОКСИМА
ПИНОСТРОБИНА


4.1

Подбор оптимальных условий оксимирования пиностробина

76

4.2

4.3

Оценка качества субстанции оксима пиностробина

Разработка опытно
-
промышленного р
егламента получения
субстанции оксима пиностробина

78


84

5

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ
КАПСУЛИРОВАННОЙ ФОРМЫ ОКСИМА
ПИНОСТРОБИНА




5.1

Разработка состава и технологии капсулированной формы на основе
оксима пиностробина


89

5.2

Оценка качест
ва капсулированной формы о
кси
ма пиностробина 50
мг.


95

5.3


5.4

Разработка технологии опытно
-
промышленного регламента на
получения капсул оксима пиностробина 50 мг

Биофармацевтическое исследование капсулированной формы
оксима пиностробина. Исследование а
бсолютной биодоступности
капсул оксима пиностробина

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ
Р
ЕКОМЕНДАЦИИ ПРАКТИЧЕСКИЕ

Р
ЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

ПРИЛОЖЕНИЯ



97



106

111


112

113

127





4

НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ



В настоящей диссертации использованы ссылки на

следующие
стандарты:

-

Инструкция по оформлению диссертации и автореферата. ВАК,
Бишкек, 2011, 23 с.;

-

Государственная фармакопея Республики Казахстан.


Жибек жолы,
-

2008.


Т.1.


592 с.;

-

Государственная фармакопея Республики Казахстан.


Жибек жолы
,
-

2008.


Т.2.


80
4

с.;

-

Государственная фармакопея Республики Казахстан.


Жибек жолы,
-

2014.


Т.3
.


872
с.;

-

Государственная фармакопея СССР Х
I
.


Медицина,
-

1987.


вып. 1.
-

336 с.;

-

Государственная фармакопея СССР Х
I
.


Медицина,
-

1987.


в
ып. 2.
-

400 с.;

-

ГОСТ 25336
-
82. Посуда и оборудование лабораторные
стеклянные. Типы, основные параметры и размеры;

-

ГОСТ 8.417
-
81. Государственная система обеспечения единства
измерений. Единицы физических величин;

-

ГОСТ 137
-
67. Реактивы. Этанол, чда;

-

ГОСТ 2
2300
-
76. Реактивы. Этиловый эфир уксусной кислоты,
чда;

-

ГОСТ 5556
-
81. Вата медицинская гигроскопическая
хирургическая хлопковая нестерильная;

-

ГОСТ 7584
-
77. Бумага лабораторная фильтровальная;

-

ОСТ 91500.05.001
-
00. Стандарты качества лекарственных
средств. О
сновные положения.


5

ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ, ЕДИНИЦ И
ТЕРМИНОВ



АНД

-

АО
«МНПХ
«Фитохимия»
-


ВАНД
-


ВР



ВЭЖХ

-

ГОСТ

-

г
-


ГФ РК

-

ГХ


ИК

-

КХ



ЛР



ЛРС



ОПР


ОФС



Система
FCPC

-


СФЭ
-


ТО
-


ТП
-


УМО



УФ



ЦХР
-


GMP
-
























Аналитический нормативный документ

Акционерное общество «Международный научно
-
производственный холдинг «Фитохимия»

временный аналитический нормативный документ

вспомогательные работы

в
ысокоэффективная жидкостная хроматография

Государственный ста
ндарт

грамм

Государственная фармакопея Республики Казахстан

газовая хроматография

спектроскопия
-

инфракрасная спектроскопия

колоночная хроматография

лабораторный регламент

лекарственное растительное сырье

Опытно
-
промышленный регламент

общая фармакопейная
статья

-

Fast

Centrifugal

Partition

Chromatograph

(быстрый
центробежный хроматограф распределения)

сверхкритическая флюидная экстракция

технологическая операция

технологический процесс

упаковка, маркировка, отгрузка

ультрафиолетов
ая спектроскопия

центробеж
ная хроматография распределения

Good Manufacturing Practice


надлежащая производственная
практика

.


6

ВВЕДЕНИЕ



Актуальность темы

В настоящее время в фарма
цевтической отрасли наблюдается

активация исследований в области изучения растительного сырья, для
в
ыявления источников получения биологически акт
ивных соединений
-

флавоноидов,

с получением новых субс
танций, позволяющих разработать

лекарственные средства для медицины и сельского хозяйства.

В плане
разработки и внедрения в практическое здравоохранение но
вых
оригинальных высокоэффективных фитопрепаратов перспективным
объектом является
тополь бальзамический

Populus

balsamifera

L
.
)


вид

лиственных

деревьев

из
рода

тополь


Populus
) семейства
Ивовые


Salicaceae
).

В культуре широко распространено в Европейской части России, а также в
Западной Европе и Азии, в Казахстане встречается в городских посадках в
Караганде и Семипалатинске
.
Препараты тополя бальзамического широко
используются п
ри болезнях суставов, как в народной, так и в традиционной
медицине.
На сегодняшний день, используют

настойку тополя
бальзамического в виде галеновых препаратов, отличающихся простотой
технологии и не требующих углубленных исследований.
Потребность в
высок
оэффективных и малотоксичных растительных препаратах диктует
необходимость разработки ускоренных схем научных исследований в области
поиска новых средств, обладающих гепатопротекторным,
противовоспаительным и антиоксидантным эффектами. На сегодняшний
день
на фармацевтическом рынке Республики Казахстан зарегистрировано
более 200 наименований дорогостоящих импортных препаратов
аналогичного действия.

На основе отечественных растительных субстанций
обладающих выраженной гепатопротекторной активностью, разработа
ны ряд
лекарственных средств, таких как салсоколлин, рувимин, лимонидин,

7

биаскин

[1
-
4]
несмотря на достижения в этом направлении активный поиск
по созданию новых гепатопротекторных средств продолжается.

В этой связи, исследования по созданию доступного ши
роким слоям
населения фитопрепарата и расширение номенклатуры лекарственных
средств гепатопротекторного, противовоспалительного, антиоксидантного
действия на основе местного, экологически безопасного сырья, содержащего
флавоноиды, является актуальной и пра
ктически важной проблемой
фармацевтической технологии.

Связь темы диссертации с крупными научными программами
или основными нау
чно
-
исследовательскими работами

Диссертационная работа выполнена в АО «Международный научно
-
производственный холдинг «Фитохимия»

в рамках следующих научно
-
технических программ: НТП (О.0530) «Разработка новых эффективных
лекарственных препаратов из растительного сырья и организация их
производства по международным стандартам GMP, на 2010
-
2012 годы» (№
0110РК00217), НИР «Развитие нан
онауки и нанотехнологий в Республике
Казахстан на 2010
-
2012 годы» по теме: «Гепатопротекторная липосомальная
лекарственная форма оксима пиностробина направленного действия» (№
0110РК00480), НТП О.0570 «Научно
-
техническое обеспечение новых
технологий перер
аботки лекарственного сырья на 2011
-
2014 годы» (№
0110РК00529), НТП О.0676 «Разработка новых фармакологических
соединений
-
субстанций оригинальных лекарственных препаратов и их
стандартных образцов» (№ гос. регистрации 0115РК01200) на 2015
-
2017
годы.

Цель р
аботы
:
р
азработка технологии и проведение стандартизации
субстанци
и

пиностробина, оксима пиностробина
и
капсулированн
ой

форм
ы

оксима пиностроб
ина

Задач
и исследования

1.

Оптимизировать

способ выделения и очистки флавоноида
пиностробина из почек тополя бальзам
ического с применением

8

сверхкритической флюидной экстракции

и
современных
хроматографических методов с последующим синтезом

оксима
пиностробина;

2.

Подобрать

оптимальный состав
капсулированной формы с оксимом
пиностробина; провести комплекс физико
-
химических
, технологических и
биофармацевтических исследований оксима пиностробина в капсулах;

3.

Подготовить нормативную документацию на субстанции,
лекарственную форму и стандартный образец пиностробина, рекомендуемые
к внедрению в медицинскую практику в виде проект
ов АНД.

4.

Разработать опытно
-
промышленный регламент на производство.

5.

Внедрить в производство эффективные, экономичные, экологически
безопасные технологии на получение субстанции пиностробина из
углекислотного экстракта почек тополя бальзамического с применен
ием
современных хроматографических методов и на получение субстанции
оксима пиностробина.

Научная новизна

полученных результатов

Впервые:



для выделения и очистки флавоноида пиностробина из СО
2
-
экстракта почек тополя бальзамического использована центробежна
я
хроматография распределения; экспериментально подобраны оптимальные
режимы получения углекислотного экстракта из почек тополя
бальзамического, выделения из него пиностробина с применением
центробежной хроматографии распределения и синтеза оксима
пиностро
бина, обеспечивающие количественные выходы качественных
целевых продуктов;



подобран оптимальный состав и технология нового лекарственного
средства

-

капсулы оксима пиностробина
и определены его
биофармацевтические характеристики



разработаны спецификации к
ачества и проведена стандартизация
субстанци
и

пиностробина, оксима пиностробина и лекарственной формы.

9

Д
ля
включения в Государственную Фармакопею Казахстана, подготовлена
монография и досье на стандартный образец пиностробина.

Практическая значимость

полу
ченных результатов
:


-

разработаны, апробированы и внедрены в производство

технологии
получения субстанции

пиностробина с применением центробежной
хроматографии распределения и

проведен

синтез оксима пиностробина.
Разработанные технологии характеризуются

в
ысокой производительностью,
сравнительной автоматизацией и значительным сокращением
продолжительности технологического процесса, исключением токсичных
растворителей;

-

разработаны проекты АНД РК на с
убстанцию пиностробина, оксима
пиностробина

и капсурованн
ой формы

«Оксим пиностробина 50 мг,
капсулы»;

-

пиностробин включен в качестве национального стандартного
образца в Государственную
Ф
армакопею Республики Казахстан,
который
предназначен для идентификации и количественного определения в
лекарственном растит
ельном сырье и лекарственных растительных
препаратах
(ГФ РК, Т.
III
., 2014⤀;

-

на основе лабораторных регламентов разработаны

и утверждены
опытно
-
промышленные регламенты на производство субстанции
пиностробина (ЛП
40
7
6
1
8
19
-
01
-
14, ОПР 40653870
-
01
-
14),
субст
анции оксима
пиностробина (ОПР ФД650050337Р
-
04
-
16


и
лекарственной формы оксима
пиностробина в капсулах (ОПР

ФД650050337Р
-
05
-
16
);

-

на базе ТОО «Карагандинский фармацевтический завод»
организован выпуск опытных партий субстанции пиностробина, субстанции
ок
сима пиностробина и
лекарственной формы оксима пиностробина 50 мг,
капсулы
.

Основные положения, выносимые на защиту.

1.

Результаты по технологии и оценке качества субстанций пиностробина
из почек тополя бальзамического с применением сверхкритической

10

флюидной

экстракции и современных хроматографических методов,а
также данные по проведению синтеза оксима пиностробина.

2.

Результаты комплексных технол
огических, биофармацевтических
и
фармакокинетических исследований по научно обоснованной
разработке состава, технол
огии препарата оксима пиностробина в
капсулах.

3.

Нормативные документы АНД на субстанцию пиностробина, оксима
пиностробина и на лекарственную форму капсул оксима пиностробина.
Стандартный образец на пиностробин, включенный в Государственную
Фармакопею Респу
блики Казахстан (ГФ РК, Т. III., 2014).

4.

Опытно
-
промышленные регламенты на производство субстанции
пиностробина, оксима пиностробина и лекарственной формы капсул
оксима пиностробина.

Личный вклад соискателя

Автор

принимала

непосредственное участие во всех
этапах
выполнения диссертационной работы:

анализа научно
-
технической и
патентной литературы, экспериментальных исследований, в разработке
способов и технологий получения промежуточной субстанций пиностробина,
оксима пиностробина, лекарственной формы на осн
ове о
ксима пиностробина
в капсулах,
опытно
-
промышленных регламентов, интерпретации и
обобщении полученных результатов исследований.

Апробация результатов исследования

Основные положения диссертационной работы доложены и
обсуждены на:
Международной научно
-
практической конференции
«Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в
физиологии и медицине» (Санкт
-
Петербург, 2010); «Современная
фармацевтическая наука и практика: традиции, инновации, приоритеты»
(Самара, 2011); на II
-
ой Международ
ной Казахстанско
-
Российской
конференции по химии и химической технологии (Караганда, 2012); Second
International Scientific onference «Regenerative medicine and healthy aging»

11

(Astana, 2012⤀;
«Современные проблемы инфекционной патологии человека»

Минск,
2013⤀;
на ХIV Российской международной конференции по
теплофизическим свойствам веществ (Казань, 2014); «Фармакология
экстремальных состояний» (Санкт
-
Петербург, 2015); на I съезде врачей
общей практики и семейных врачей
Кыргызстана «Вестник»
(Бишкек, 2015)
,

Международной научно
-
практической конференции «Достижения и
перспективы развития фитохимии» (Караганда, 2015), «Разработка,
исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск,
2011).

Полнота отражения

результатов диссертации в публик
ациях

Основные положения диссертационной работы отражены в
17

печатных работах, из них
7

статей в периодических научных изданиях и
тезисы
8

докладов, 2 моно
публикации
.

Структура и объем диссертации

Диссертационн
ая работа состоит из введения; 5

глав, содер
жащих
-

обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты
собственных исследований; выводов; практических рекомендаций; списка
использованной литературы и приложений.

Работа изложена на 1
36

страницах компью
терного текста,
иллюстрирована 1
3

рис
унками и диа
граммами, содержит
19

таблицы, 8

приложения. Библиог
рафический указатель содержит 128

источник
русскоязычных и иностранных авторов, включая собственные публикации.








12


ГЛАВА

1

ФЛАВОНОИДЫ


ПЕРСПЕКТИВНЫЕ ИСТОЧНИКИ
НОВЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРА
ТОВ

(обзор литературы)



1.1

Лекарственные препараты на основе биологически активных
флавоноидов


В связи с широким спектром биологической активности одной из
популярных моделей изучения структура
-
активность являются продукты
вторичного метаболизма растений


флавоноиды.

Флавоноиды
-

уникальный класс биологически активных соединений
(БАС), обладающих низкой токсичностью и разнообразными
биологическими свойствами. Лекарственные средства флавоноидной
природы с успехом применяют в качестве антиоксидантов, ангио
-

и

гепатопротекторов. Это дает основание рассматривать флавоноиды в
качестве веществ, наиболее перспективных для создания
высокоэффективных полифункциональных лекарственных препаратов.


Интерес к фенольным соединениям вообще и к их биологическому
действию, в

частности, вызван широким, практически всеобщим,
распространением в растительном и животном мире, наличием у этого класса
веществ с достаточно высокой и разнообразной химической, биохимической
и

физиологической активностью
. По мере выделения, очистки, изу
чения
фенольных соединений, стало возможным их использование и в качестве
фармакологи
ческих средств
.

Поражения печени различной этиологии являются достаточно широко
распространенной патологией. По данным ВОЗ в мире


2 миллиарда человек

13

с патологией печени
, что в 100 раз превышает распространенность ВИЧ
-
инфекции [
5
]. Среди

широкого круга препаратов, используемых в
комплексной терапии заболеваний печени, выделяют сравнительно
небольшую группу «истинных» гепатопротекторов, эффективность которых
не всегда оказ
ывается достаточной.

В патогенезе поражений печени (токсической, алкогольной и другой
этиологии) большое значение отводится окислительному стрессу [
6
]. При
оксидативном стрессе, в первую очередь, наблюдается сдвиг про
-
антиоксидантного равновесия в сторону
усиления прооксидантной
составляющей, снижение резервов мобилизации антиоксидантной защиты,
что сопряжено с нарушением энергообеспечения клетки, детоксикационных
механизмов, активацией апоптоза, провоспалительных цитокинов и др. [
7
].

Окислительный стресс
инициирует нарушения, связанные с
кровоснабжением печени (повреждение эндотелия сосудов и синусоидов
печени с изменением выработки оксида азота, ухудшение реологических
свойств крови, состояния микроциркуляторного русла и пр), что усугубляет
течение патоло
гического процесса [
8
].

Многофакторность патогенеза поражений печени требует, чтобы и
защита осуществлялась на различных уровнях и структурах, что определяет
перспективность поиска новых гепатопротекторов среди флавоноидов, для
которых выявлено более 40 ви
дов фармакологической активности [
9
].
Несмотря на значительное число работ, посвященных изучению
гепатозащитных свойств флавоноидов, сравнительного изучения
эффективности их действия не проводилось. Не выяснены до конца и
механизмы их гепатопротекторной ак
тивности. Большинство исследователей
считают, что основой такового является антиоксидантное действие [
10
].

Поэтому сегодня актуальным является поиск новых эффективных и
безопасных гепатозащитных препаратов. Растительные экстракты всегда
привлекали внимание

исследователей в качестве эффективных и безопасных
субстанций для получения лекарственных средств. За последнее время

14

интерес к изучению натуральных растительных экстрактов возрос благодаря
антиоксидантным свойствам, которые проявляют многие из них, содер
ж
ащие
полифенольные соединения [11
].

Многочисленными работами показано влияние полифенолов на
биохимические процессы, протекающие в расти
тельном и животном
организмах [
12
-
13
]. Опытами
in

vitro

было показано, что ингибиторы
-

антиоксиданты обладают способно
стью подавлять окислительно
-
восстановительные процессы в раковых клетках (биологическое окисление и
гликолиз), уменьшать в них содержание РНК, угнетать биосинтез белка.
Некоторые из этих эффектов могут быть объяснены действием свободных
радикалов, образующ
ихся в результате превращения ингиб
иторов в
клеточном субстрате
.

Рядом работ продемонстрировано влияние полифенольных
ингибиторов свободно
-
радикальных процессов на важнейшие
биохимические процессы дыхания и гликолиза [
14
]. Известно, что
полифенолы обладают

сосудоукрепляющим действием, влияют на ЦНС,
эндокринную систему, повышая сопротивляемость организма ко всякого
рода вредным воздействиям. В малых дозах фенолы улучшают репаративную
регенерацию тканей, оказывая благоприятное действие при лечении
трофически
х и лучевых язв. Некоторые флавоноиды, в частности катехины,
повышают сопротивляемость организма облучению, увеличивая
продолжительность жизни подопытных животных
-

опухоленосителей до 69
% в сравнении с контролем.

Флавоноиды широко распространены в растит
ельном мире, и
присущи в основном высшим растениям. Было установлено, что
биологическое действие обширной группы флавоноидных препаратов
зависит от их структуры [
1
5
]. Из флавоноидов наибольшим биологическим
эффектом обладал лейкоэфдин (группа лейкоантоциан
идинов), который в
малых дозах (5 мг/кг) оказывал радиозащитное, в средних (35 мг/кг) в
основном радиосенсибилизирующее и в больших (70
-
80 мг/кг)

15

противоопухолевое действие. Группа катехинов проявила
радиосенсибилизирующие свойства, кверцетин обладал умере
нным
противоопухолевым и выраженным радиозащитным действиями [
16
-
17
]
.

Большой интерес исследователей вызывают флавоноиды как
перспективные противоопухолевые средства. В отличие от средств, обычно
применяемых в терапии новообразований, флавоноиды, обладающи
е
противоопухолевой активностью, нетоксичны и способны предотвращать
метастазы при некоторых видах лимфосаркомы. Во многих
экспериментальных исследованиях на культурах клеток продемонстрировано
противолучевое и противоопухолевое действие флавоноидов.

Для
ф
лавоноидов
, как и для других природных веществ, не
существует способа выделения, универсального для всех растительных
материалов. Наиболее часто используются избирательная экстракция,
осаждение с помощью солей тяжелых металлов и хроматографические
методы.

Метод избирательной (селективной) экстракции заключается в
извлечении флавоноидов из растительного материала различными
растворителями в определенной последовательности. Спиртовое извлечение
упаривают, к остатку добавляют горячую воду и после охлаждения у
даляют
неполярные соединения (хлорофилл, жирные масла, эфирные масла и др.) из
водной фазы хлороформом или четыреххлористым углеродом.

Флавоноидные гликозиды извлекают из водной фазы последовательно
этиловым эфиром (агликоны), этилацетатом (в основном мон
озиды) и
бутанолом (биозиды, триозиды)
[18].

Широта терапевтического действия, присущего как индивидуальным,
так и суммарным флавоноидам, многообразие физико
-
химических свойств
обусловили создание большого числа их лекарственных форм. Н
а основе
природных ф
лавоноидов
разработаны более 100 комплексных флавоноидных
препарат
ов и еще большее число лекарственных форм.


16

В области химии полифенольных соединений в настоящее время
достигнуты значительные успехи за счет концентрации усилий ряда научных
школ на данном н
аправлении. Препараты на основе растительных
полифенолов и растений, богатых соединениями данного класса, находят
широкое применение в медицине. Известны препараты «Силибор»,
«Силибинин» («Легалон»), «Катерген», «Валлилив», «Диквертин»,
«Лохеин», «
Силимари
н», «Максар»,
«Фламин», «Конвифлавин»,
«Флакумин», «Альтан», применяемые в качестве гепатопротекторов и
желчегонных средств. В Казахстане вышеназванные препарат
ы пока не
производятся. Данные
препараты на основе полифенолов растений
Казахстана за счет налич
ия значительной ресурсной базы растительного
сырья могут быть внедрены в масштабное производство и выйти на мировой
рынок.

В качестве средства,

повышающего общую
устойчивость организма
известен

водно
-
спиртовый экстракт гребней винограда, содержащий
комплек
с полифенольных соединений и обладающий антиоксидантным,
противовоспалительным, фунгистатически
м, антимикробными действиями
[19
].

Известно из источников литерат
уры [2
0
] лекарственное средство

из
экстракта гребней калины, полученное на 40% этаноле и содерж
ащее в
химическом составе флавоноиды, оказывающее выраженное
гепатопротекторное действие на модели алкогольной интоксикации.

На основе экстракта лимонника китайского разработано
гепатопротекторное средство, повышающее сопротивляемость организма к
воздейств
ию химических веществ техногенного происхождения, стрессовым
ситуациям, алкогольным отравлениям [2
1
].

Получен биотехнологическим методом экстракт из биомассы
Maackia

amurensis

Rupr
. е
t

Maxim
. Экстракт в химическом составе содержит
полиф
енольный комплекс,
состоящий из

дайдзеина (1), генистеина (2) и
маакаина (3)

[22
].


17






(1⤀







(2⤀






(3⤀

Хофитол

-

препарат, полученный из очищенного экстракта листьев
артишока в изотоническом растворе выпускается в ампулах по 0,1 г.
Основно
е гепатопротекторное

и желчегонное действие обусловлено
наличием в экстракте фенольного соединения цинарина в сочет
ании с
фенолокислотами кофейной и хлоргеновой. Влияет на функциональную
активность печеночных клеток, стимулирует выработку ферментов, этим и
объясняется влияние препарата на липидный, жировой обмен, повышение
а
нтитоксической функции печени [23].

Комплексн
ое воздействие полифенольных веществ, таких как
лютеолин (4), цинарин, кофеиновая, хлорогеновая и феруловая кислоты,
препятствует биосинтезу холестерина за счет специфического блокирования
активации ГМГ
-
КоА
-
редуктазы инсулином, не воздействуя на другие
инс
улинзависимые явления (такие как синтез молочной кислоты).


Калефлон

(Сaleflonum)
-

очищенный экстракт из цветков ноготков
лекарственных (Саlеndula officinalis L.). Сумма флавоноидов (не менее 12%)
входит в состав препарата «Калефлон» (изорамнетин, изорам
нетина 3
-
глюкозид, нарциссин, изорамнетина 3
-
b
-
глюкопиранозид, изорамнетина 3
-
b
-
D
-
глюкопиранозид
-
6
-
1
-
b
-
L
-
рамнофуранозид, кверцетина 3
-
b
-
D
-
глюкопиранозид).
Одним из основных действующих веществ,
обуславливающих фармакологическую акти
вность, является изорамн
етин
,
поэтому количественное содержание суммы флавоноидов определяют в
пересчете на изорамнетин (5).











⠀4)


(5⤀


18

Калефлон представляет собой порошок светло
-
коричневого (до
коричневого) цвета со слабым специфическим запахом. Практичес
ки
нерастворим в воде и спирте
[
23
-
24
].

Кверцетин

⠀3,5,7,3
'
,4
'
-
пентагидроксифлавон) (6)
-

самый
универсальный биофлавоноид, мощный

антиоксидант, одно из лучших
натуральных антигистаминных и противовоспалительных средств.
Кристаллический порошок желтого цвета. Практически нерастворим в воде,
растворим в растворах щелочей [25
-
27
].

Способ получения кверцетина (6) заключается в том, что
древесину
лиственницы одновременно подвергают окислению сернистокислым натрием
и гидролизу перегретым водяным паром с посл
едующей быстрой
декомпрессией [2
8].

Ликвиритон

Liquiritonum
) содержит сумму флавоноидов из корней
солодк
и голой или солодки уральско
й,
не менее 55 %

суммы флавоноидов,

в
пересчете на ликуразид (7).








(6)



(7⤀

В технологии получения ликвирито
на впервые в промышленном
масштабе реализован процесс хроматографирования на полиамидном
сорбенте, который широко используется в исследованиях по выделению
индивидуальных веществ фенольной природы.

Технология комплексной переработки солодки позволяет при
п
роизводстве глицирама или очищенного экстракта одновременно получать
порошкообразную субстанцию проликвиритона, содержащую около 20 %
флавоноидов (в ликвир
итоне
-

около 55%) [29
-
30
].

Рутин
(8⤀

(3
-
Рутинозид кверцетина; 3
-
рамногликозил
-
3,5,7,3
'
,4
'
,
-
пентаокс
ифлавон). Рутин представл
яет собой мелкокристаллический
порошок зеленовато
-
желтого цвета. Практически нерастворим в воде,

19

ацетоне, бензоле, хлороформе, эфире, трудно
-

в
кипящем этаноле, мало
растворим

в этаноле, растворим в разбавленных растворах едких щ
елочей.




(8⤀


Сырьем для производства служат бутоны цветов софоры японской

Sophora japonia

L.) семейства Бобовых (
Leguminosae
).

Для выделения рутина
(8) из бутонов со
форы японской экстракцию проводят горячей водой. При
охлаждении водных извлечений рутин выпадает в осадок, его
отфильтровывают и очищают перекристаллизацией из спирта. Выход 10
-
12
%
о
т веса воздушно
-
сухого сырья [31
].

Рутинсодержащие таблетки Амитетравит,
представляющий собой
комплекс поливитаминов и аминокислот, используют в каче
стве
адаптогенного средства [32
-
33
].

Капсулы водорастворимого рутина

обеспечивает его наиболее полную
биодоступность по сравнению с другими тв
ердыми лекарственными
формами
Спектро
фотометричекое определение рутина проводят в растворах
или непосредственно с хроматограмм после закрепления окраски пятен
специфическими проявителями
[34
-
35
].

Салсоколлин
-

создан на основе экстрактивных веществ надземной
части солянки холмовой, однолетне
го травянистого растения
Salsola

с
ollina

Pall
.
ex

Spreng
, содержащий комплекс биологически а
к
тивных веществ [
1, 36
-
37
].

В экстракте солянки холмовой определены фенольные соединения
(рутин (8), кверцетин (6), изорамнетин
-
3
-
гликозид, трицин), аминокислоты,

дубильные вещества, углеводы [38
].

Порошок от светло
-
коричневого до коричневого цвета, полученный
экстрагированием из надземной части солянки холмовой (
Salsola

с
ollina

Pall
.⤀

20

70 %
-
ным этиловым спиртом.
Р
астворим в воде, спиртах, имеет
специфический запах
и вкус.

Высокая антиоксидантная активность препарата, связанная с
присутствием флавоноидов, обеспечивает гепатопротекторный эффект.

Препарат уменьшает выраженность болевого, диспептического,
астенического, цитолитического и холестатического синдрома, бла
готворно
воздействует на липидный, пигментный, белковый обмен [
39
].

Препарат показан при хронических вирусных, алкогольных,
токсических гепатитах, циррозах печени различной этиологии; при
дискинезиях желчевыводящих путей и хронических бескаменных
холецисти
тах. В качестве профилактики холелитиаза; при приеме большого
количества веществ и медикаментов, отягчающих функции печени; в
качестве лечебного и профилактического средства при хронических
гастритах и ишемической болезни сердца [
40
-
41
].

Применение диффере
нциально
-
спектрофотометрического метода
позволило определить сумму флавоноидов в присутствии других
полифенольных соединений в препарате «Салсоколлин», не образующих
комплекса с алюминия хлоридом в среде 95 % этилового спирта при рН 2,0
-
3,0. Максимум погл
ощения растворов препарата «Салсоколлин»
соответствует спектральным характеристикам стандартного образца рутина
(8), что позволило использовать для дальнейших исследований показания
оптической плотности растворов опытн
ых образцов при λ411 нм [42
].

Технол
огия получения субстанции «Салсоколлин» из травы солянки
холмовой включает следующие этапы: четырехкратная экстракция 70 %
спиртом, упаривание на ротационном испарителе и высушивание
промежуточного продукта солянки

холмовой методом сублимации [
43
].

Силибо
р
-

суммарный препарат, состоит из суммы флаволигнанов.
Основными компонентами суммы являются силидианин, силибин и их
дегидропроизводные [44
]. В 1 таблетке Силибора содержится: силимарина (в
пересчете на 100% содержание флаволигнанов [силимарина]) 35 мг).


21

C
илимарин представляет собой смесь по меньшей мере семи флаволигнанов,
содержащихся в экстракте семян расторопши пятнистой (
Silybum marianum

L.). Основная доля приходится на силибин (9), силидианин (10) и
силикристин (11).

Силибор
является

аналогом зарубе
жных
препаратов типа

легалона и
карсила. Источником сырья является плоды расторопши пятнистой. В
качестве стандартного образца при стандартизации таблеток Сил
ибор
используется силибин (9) [45
].

Разработана промышленная комплексная технология переработки
п
лодов расторопши пятнистой [
46
-
47
]. По результатам исследований
получены масло расторопши
-

субстанции силибор
-

гепатопротекторного
действия [
48
-
49
].

Способ комплексной переработки плодов расторопши пятнистой
заключается в том, что из плодов расторпши выд
еляют масло, затем маслом
экстрагируют траву ромашки и календулы и оставшийся жмых подвергают
переработке. В результатае осуществления способа получают средство,
обладающее гепатозащитным действием, средство для лечения кожных
заболеваний и корм для скота.






(9)

(10⤀

(11⤀

Известен способ получения суммы флаво
л
игнанов (
препарат
«Карсил» гепатопротекторного действия), по которму измельченные плоды
расторопши обезжиривают циклогексаном в соотношении 1:3 (сырье
-
растворитель) в течение 3 ч. При температуре 75
-
80
0
С. Недостатком данного
способа является многостадийность и испо
льзование больших количеств
растворителей.


22

Известен также способ получения масла расторопши пятнистой,
которое обладает ранозаживляющей активностью. Из плодов расторопши
выделяют масло, обладающее ранозаживляющим действием, затем маслом
экстрагируют траву
ромашки и календулы с получением лекарственного
средства, обладающего противовоспалительным и ранозаживляющим
действием, жмых, оставшийся после выделения масла, экстрагируют
этиловым спиртом при нагревании и перемешивании, затем экстракт
концентрируют, кон
центрант очищают петролейным эфиром при
соотношении 2:1 соответсвенно, и осаждают целевой продукт, обладающий
гепатопротекторным действием, 0,025%
-
ным раствором соляной кислоты;
шрот, образовавшийся в процессе переработки расторопши пятнистой,
используют в

качестве кормовой добавки для скота.

Жирное масло, которое выделяют из плодов расторопши методом
механического прессования, используется как самостоятельный продукт, так
и в качестве составной части лекарственного средства при лечении кожных
заболеваний и

ожогов.

Способ получения суммы флаволигнанов заключается в экстракции
жмыха 8%
-
ным этиловым спиртом методом быстротекущей реперколяции,
упаривании спиртовых извлечений до водного кубового остатка, очистки
петролейным эфиром для удаления остатков жирного м
асла и осаждения
флаволигнанов 0,025%
-
ным раствором соляной кислоты. Полученный
остаток, содержащий до 65
-
80% действующих веществ, является препаратом
силимар для лечения заболеваний печени и нормализации пищеварительного
процесса. При получении препарата
силимар в сравнении с известным
способом получения препарата карсил обезжиривание проводится методом
механического прессования без использования органического растворителя,
что ускоряет, упрощает и значительно удешевляет данную стадию и
позволяет получить
жирное масло для дальнейшего использования в качестве
самостоятельного лекарственного средства и композиции. Не требуется
дополнительная сушка сырья для удаления циклогексана. Экстракция 80%
-

23

ным этиловым спиртом исключает использование пожароопасных
циклог
ексана и ацетона. При этом, использование метода быстротекущей
реперколяции с нагреванием и перемешиванием ускоряет процесс и
повышает выход действующих веществ в возможно более полном объеме
при сохранении природной комбинации.

Флакарбин

(Flacarbinum)
-

к
омбинированный препарат, в 100 г
которого содержится по 2 г ликуразида (
7
) и кверцетина (
6
), по 10 г пектина
и натрий
-
карбоксиметилцеллюлозы и 76 г

глюкозы. Противиязвенное
действие гранул Флакарбина обусловлено содержанием кверц
етина и
ликуразида из соло
дки [43
]. Применяют как противовоспалительное,
спазмолитическое, капиллярукрепляющее и мягкопослабляющее средство у
больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки.
Выпускают в гранулах зеленовато
-
желтого цвета, сладковатого вкуса [
50
-
51
].

Фла
козид

(Flacosidum), получаемый из листьев бархата амурского

Phellodendron Amurensis

Rupr.) и листьев бархата Лаваля (
Phellodendron
Amurensis

var. Lavallei Spraque), семейство Рутовых (
Rutaceae
).

По химическому строению флакозид (12) представляет собой 7
-
b
-
D
глюкопиранозид
-

8 (3
-
метил
-
бутил
-
2
-
энил)
-
4‘,5,7
-
триоксифлава
ноном. Он
близок по структуре
рутин
а

(8) и другим флавоновым
соединениям группы
витамина Р [52
]. Активными компонентами препарата являются флавоноиды,
которые угнетают репликацию вирусов прос
того герпеса I и II типа, вируса
Varicella
zoster и вируса Эпштейна
-
Барр [53
-
54
]. Содержание флакозида (12)
определяют хроматоспектрофотометрическим методом [
55
-
57
].


(12⤀

Флакумин


Flacuminum
)
-

представляет собой сумму
флавоноидных
агликонов получаемых из листьев скумпии (
Cotinus

coggygria

Scop
), сем.

24

Сумаховых (
Anacardiaceae
). Флакумин, содержащий флавонолы (мирицетин
(13), кв
е
рцетин (6), кемпф
е
рол (14)), и фламин, в состав которого входят
халконы, флавоны, флавононы, ф
лавонолы [
58
-
61
].







(13) (14⤀


Зеленовато
-
желтый мелкокристаллический порошок со слабым
специфическим за
пахом, слегка горького вкуса. Практически нерастворим в
воде, мало
-

в спирте. Обладает желчегонным эффектом, оказывая главным
образом спазмолитическое действие на желчные ходы и способствуя
выделению желчи из желчного пузыря. Применяют в качестве желчегон
ного
средства, особенно при дискинезии желчевыводящих путей. Форма выпуска:
таблетки, покрытые оболоч
кой желтого цвета [
62
-
64
]. Как
противоожоговое
средство рекомендуют использовать флакуминовую мазь и 15%
прополисную мазь с добавлением 0,1 % цетилпиридини
я хлорида [
65
].
Применяется как противовирусное, гепатопротективное, антиоксидантное
средство. Активен против ДНК
-
соде
ржащих вирусов группы герпеса [66
].

Фламин

представляет собой смесь флавоноидов. Сырьем для
производства фламина используют цветки бессмер
тника песчаного

Helichrisum

arenarium


L
.)
Moench
.). Фламин оказывает желчегонное и
противовоспаалительное действия, назначают при холесцистите, холангите.
Усиливает секрецию желчи и увеличивает содержание в ней билирубина,
повышает тонус желчного пузыря
и способствует оттоку желчи
[
67
].


Известно, что в цветках бессмертника и фламине содержится сумма
флавоноидов (не менее 20 соединений), относящихся к различным группам:
флавоны (апигенин (15), лютеолин (4)), флавонолы (кемпферол (14),
кверцетин (6) и их г
ликозиды, 3,5
-
дигидрокси
-
6,7,8
-

25

триметоксифлавоноловые гликозиды), халконы (изосалипурпозид (16)),
флаваноны ()
-
нарингенин, (
-

-
нарингенин (17) и их глюкозиды).





(15)






(16⤀



(17⤀


Препарат «Фламин» оказывает расслабляющее действие на гладкую
мускулатуру сфинктеров желчного пузыря и желчевыводящих путей,
изменяет вязкость и химический
состав желчи. Стимулируя выделение
желудочного сока и замедляя эвакуаторную функцию желудка и кишечника,
способствует более качественному перевариванию пищи.
Выпускают в
таблетках по 0,05 г

[68
].

Желтый негигроскопичный порошок с содержанием флавоноидов
95
% и более, со слабым специфическим запахом и горьким вкусом.
Растворим в 50% и 96% этиловом спирте, плохо растворим в воде,
практически нерастворим в хлороформе, бензоле и дихлорэтане. Общий
выход препарата составляет приблизительно 70% от с
одержания
флаво
ноидов в сырье [68
].

Технология выделения и очистки флавоноидов из сырья бессмертника
песчаного включает экстракцию 50%
-
ным этанолом выпарку в вакууме на
роторном испарителе, фильтрацию, экстракцию жидкость


жидкость,
упаривание на роторной пленочной уст
ановке в вакууме, сушку, измельчение
сухой массы до получения однородного порошка фламина [
68
-
69
].

Хелепин


elepinum


-

о
чищенный экстракт из надземной части
растения леспедецы копеечковой (
Lespedeza hedysazoides

(Pall.) Kitag), сем.
Бобовых (
Fabaceae
.

Ам
орфный порошок зеленовато
-
желтого цвета с
сероватым или зеленоватым оттенком, гигроскопичен. Обладает

26

противовирусной активностью в отношении ДНК
-
содержащих вирусов
группы герпеса [46, 60]. Применяют у взрослых внутрь и наружно при
опоясывающем герпесе, ре
цидивирующих формах простого герпеса, при
заболеваниях слизистых оболочек полости рта вирусного происхождения.
Местно применяют в виде 5 % мази на кожу и 1 % мази на слизистые
оболочки. Препарат более эффективен при начальных формах заболевания,
поэтому ле
чение рекомендуется начинать при ранних признаках заболевания
или рецидива. Форма выпуска: таблетки, покрытые оболочкой желтого цвета,
по 0,1 г в упаковке по 10 и 20 штук; 1 % или 5 % мазь от серовато
-
желтого до
коричневого (с зеленоватым оттенком) цвета в

упаковке по 20 г [46]. Данный
препарат содержит сумму флавоноидов, в пересчете на ориентин (18) (55 % и
более).





(18⤀

Технология комплексной переработки солодки позв
оляет при
производстве глицирама или очищенного экстракта одновременно получать
порошкообразную субстанцию, содержащую около 20 % флавоноидов.

Казахстанский препарат из солодки «Рувимин» применяют при
язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки,
хронических
гастритах в качестве спазмолитического, антисекреторного,
противовоспалительного и способствующего регенерации

слизистой
оболочки средства [2
].

Легалон обладает гепатопротекторным и антитоксическим действием.
Механизм действия связан с ингибир
ованием перекисного окисления
липидов, вследствие чего предотвращается разрушение клеточных мембран.
Антиоксидантный эффект Легалона обусловлен взаимодействием

27

силибинина (9) со свободными радикалами в печени и преобразованием их в
менее токсичные соединен
ия. Тем самым прерывается процесс перекисного
окисления липидов и не происходит дальнейшего разрушения клеточных
структур; токсины обезвреживаются физиологическим путем. Легалон
стимулирует биосинтез структурных и функциональных белков и
фосфолипидов (за с
чет специфической стимуляции РНК
-
полимеразы А) и
ускоряет регенерацию клеток печени. Клинические действие Легалона
проявляется в улучшении общего состояния заболевших с заболеваниями
печени, уменьшении субъективных жалоб (таких как слабость, ощущение
тяже
сти в правом подреберье, потеря аппетита, кожный зуд, рвота).
Улучшаются лабораторные показатели: понижение активности трансаминаз,
гамма
-
глутамилтрансферазы, щелочной фосфатазы и уровня билирубина в
плазме крови. Длительное применение Легалона достоверно
увеличивает
процент выживаемости заболевших, страдающих циррозом печени.

Препарат «Легалон» является эталонным гепатопротектором, который
рекомендован официальными изданиями Фармакопейного комитета в
качестве препарата сравнения при испытании новых средств
, обладающих
гепатопротекторными свойствами растительной природы и выпускается в
виде драже, капсул и суспензий [
69
-
70
].

Самарским государственным медицинским университетом проведено
изучение химического состава тополя бальзамического и установлено
наличие

комплекса БАВ: эфирные масла, флавоноиды, фенольные
соединения, органические кислоты, широкий спектр макро
-

и
микроэлементов
[
7
1
]
.

В Северо
-
Казахстанском государственном университете проведено
изучение химического состава почек тополя бальзамического, кот
орое
позволило создать лекарственные формы для применения в области
стоматологии, гинекологии и дерматологии, разработать способы получения
кормовых добавок и рострегулирующих композиций и предложить
безотходную технологию переработки сырья. Кроме того, пр
епараты на

28

основе почек тополя оказывают болеутоляющее и регенерирующее действие,
обладают способностью выводить соли из отложений и проявляют
противовоспалительную, ранозаживляющую, антибактериальную
активность. Простой способ получения субстанции на осно
ве экстрактивных
веществ “Тополин” может стать основой для создания лекарственных форм и
широкого их применения в медицине. Налажено производство и выпуск
лекарственных форм на основе масла почек тополя (экстракты, мази, свечи,
пленки)
[
7
2
]
.

Полифенольные
соединения, которыми богаты многие растения,
эффективно уменьшают перекисное окисление липидов. Окисленные
липопротеины низкой плотности (ЛПНП) активнее захватываются
макрофагами, чем немодифицированные, вследствие чего увеличивается
накопление холестерина

в интиме аорты. Снижение окисления ЛПНП под
действием антиоксидантных препаратов приводит к
а
нтиатеросклеротическому эффекту

[
73
-
76
].

Отдельную группу флавоновых препаратов образуют средства,
полученные из подземных органов шлемника байкальского.

На основ
е сухого экстракта из корней и корневищ шлемника
байкальского разработан препарат «
Скутекс
», выпускающийся в виде
таблеток, покрытых оболочкой. Основными действующими веществами
препарата являются флавоновые глюкурониды


байкалин, вогонозид,
ороксилозид и

другие.

Препарат проявляет ноотропные свойства, улучшает процессы
обучения и памяти, уменьшает последствия гипоксической травмы при
профилактическом применении и лечении развитой энцефалопатии в
отдаленные периоды после полученной травмы.

В эксперименталь
ных и клинических исследованиях было выявлено,
что скутекс предупреждает развитие нарушений обучения и памяти,
возникающие под влиянием скополамина, в амнестическом и
диссоциирующем типе действия, уменьшает проявление синдрома отмены

29

после длительного прим
енения бенздиазепиновых транквилизаторов,
уменьшает токсичность гексенала, алкоголя, коразола, бикукумина и
тиосемикарбазида; проявляет умеренное противоагрессивное действие,
улучшает поведение в конфликтной ситуации и после перенесенного стресса,
а также
улучшает интегративные функции мозга.

Скутекс назначают для лечения больных с астеническими и
астенодепрессивными состояниями соматогенного и психогенного генеза,
больных с энцефалопатиями разнообразного генеза. Препарат может
назначаться в сочетании с дру
гими ноотропными средствами для больных,
которые применяют фармакотерапию длительное время и для профилактики
стрессорного состояния. Скутекс рекомендуется также для лечения больных
с церебральным атеросклерозом в сочетании с гипертонической болезнью
[88].

Среди препаратов флавоноидной природы, обладающих
нейротропным и психотропным эффектом следует упомянуть билобил
(производства
KRKA
, Словения). Билобил представляет собой
стандартизованный экстракт листьев растения
Ginkgo

biloba

L
., в составе
которого сод
ержатся биофлавоноиды аментофлавон, гинкгетин, а также
флавоноидные гликозиды кемпферола (14), кверцетина (6) и ряд других
веществ. Имеются данные о нейропротекторном эффекте билобила при
церебральной ишемии у экспериментальных животных и у детей с
синдр
омом дефицита внимания, нейроциркуляторной дистонией и
гиперактивностью [89].

Для перспективных разработок используются новые соединения
флавоноидной природы различных классов, а также ряд из синтетических
производных и комбинаций с другими природными и си
нтетическими
компонентами [90
-
91].

Кроме упомянутых препаратов, разработаны и предложены для
практической медицины Р
-
витаминные препараты из аронии черноплордной
на основе антоцианов, из листьев чая


на основе катехинов, из плодов

30

цитрусовых


на основе
флаванонового гликозида гесперидина и его
халконового изомера [92].

Индивидуальное соединение диквертин (19) (дигидрокверцетин

или
3,5,7,3’,4’
-
пентагидроксифлаванон или таксифолин), получено из древесины
хвойных Н.А. Тюкавкиной с соавторами [93
-
95] рекомен
дован в качестве
антиоксиданта для лечения различных заболеваний и в виде пищевой
добавки. Выпускается индивидуально или в комбинации с аскорбиновой
кислотой в виде таблеток.





(19⤀


Необходимо отметить, что создание лекарственных форм на основе
субстанций природного происхождения обеспечивает максимальную
биологическую доступность природных веществ, точное и непрерывное
дозирование в течение длительного промежутка времени и

устранение
биодеструкции ферментами желудочно
-
кишечного тракта.


1.2.

Применение центробежной

хроматографи
и распределения

для выделения и очистки флавоноидов


В последнее время широкое распространение получает сравнительно
новый вид хроматографии
-

центробежна
я хроматография распределения
(ЦХР)


метод, позволяющий избежать проблем, связанных с твердофазными
адсорбентами и сохранить химическую целостность смесей, подвергаемых
разделению, при этом ЦХР обеспечивает высокую скорость разделения, не
требует большого

количества дорогостоящих элюентов, что значительно
снижает себестоимость целевого продукта (табл
.

1
.1.
).



31

Таблица 1
.1

-

Сравнительные характеристики хроматографии нормального
давления (ХНД), высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)
флеш
-
хроматог
рафии (ФХ
-
1), флюидной хроматографии (ФХ
-
2) и
центробежной хроматографии распределения (ЦХР)

Основные
характеристики

ХНД

ВЭЖХ

ФХ
-
1

ФХ
-
2

ЦХР

Сорбент

исполь
-
зуется

исполь
-
зуется

исполь
-
зуется

исполь
-
зуется

не исполь
-
зуется

Процент
возврата пробы




100

%




100

%




100

%




100

%


100

%

Качество
растворителя

высокое

высокое

высокое

высокое

низкое

Потребление
растворителя

большое

большое

большое

большое

малое

Подготовка
пробы

дополни
-
тельная

обработка

дополни
-
тельная
обработка

дополни
-
тельная
обработка

д
ополни
-
тельная
обработка

фильтро
-
вание

Производст
-
венные расходы

высокие

очень
высокие

очень
высокие

высокие

невысокие

Например, центробежная хроматография распределения была
успешно использована

авторами
[
9
5
] при исследовании экстракта родиолы
розовой (
Rhodiola rosea

L.
), полученном ультразвуковой экстракцией в воде с
добавлением бромида 1
-
этил
-
3
-
метилимидазолия (2 моль/л), методом
высокоскоростной жидкость
-
жидкостной хроматографии выделены 4
флаво
ноидных гликозида: гербацетин
-
3
-
O
-
d
-
глюкопиранозил
-
7
-
O
-
l
-
рамно
-
пиранозид (
20
), кемпферол
-
3
-
O
-
d
-
глюкопиранозил
-
7
-
O
-
l
-
рамнопиранозид

21
), кемпферол
-
3
-
O
-
d
-
глюкопиранозид
-
(2→1)
-
d
-
ксилопиранозид (
22
) и
гербацетин
-
8
-
O
-
d
-
глюкопиранозид (
23
). Разделение проводили

на установке
TBE
-
300B с ротором объемом 280 мл, система растворителей этилацетат
-
н
-
бутанол
-
вода (4:1:5, об./об.), подвижная фаза


нижний слой.


32







20
)




21











22
)



23


Использование жидкость
-
жидкостной хроматографии позволило
получить три флавоноида: каранжин (
24
), пиннатин (
25
) и понгафлавон (
26
)
из этанольного экстракта
Millettia pinnata


L.
) Panigrahi. Разделение
проводилось на установке TBE
-
300A в системе растворителей, состоящей из
н
-
гексан
-
ацетонитрил
-
дихлорметан
-
вода (5:5:1:5)
[
9
6
].







24
) ⠀
25
)



26




Успешно применен
метод ЦХР

для выделения и очистки трех
флавоноидов из
китайского лекарственного растения
Epimedium korea
n
um

Nakai с использованием в качестве двухфазовой системы растворителей
состава хлороформ
-
метанол
-
вода (4:3,5:2). Метод обеспечил выход 11,4 мг
эпимедокореанозида (
27
), 46,5 мг икариина (
28
) и 17,7 мг икари
зида (
29
) из
200 мг пробы при одноступенчатом разделении с чистотой 98,2 %, 99,7 %
и

98,5 %, соответственно (согласно данным ВЭЖХ)
[
9
7
].


33



(27
-
29⤀

Несколько флавоноидов, включая 2',3,4,4'
-
тетрагидроксихал
кон (
30
),
5,6,7,4'
-
тетрагидроксифлавон (
31
) и бутин (
32
), из семян
Vernonia
anthelmintica


L
.) Willd были разделены методом высокоскоростной
противоточной хроматографии с использованием двухступенчатой
процедуры. Использовали два различных типа систем раст
ворителей: смесь
хлороформ
-

дихлорметан
-

м
етанол


вода (2:2:3:2) и смесь

1,2
-
дихлорэтан
-

метанол
-

ацетонитрил
-

вода (4:1,1:0,25:2). Из 1 кг семян этим методом
выделено около 45 мг 2',3,4,4'
-
тетрагидроксихалкона (
30
), 40 мг 5,6,7,4'
-
тетрагидроксифлав
она (
31
) и 55 мг бутина (
32
). Каждый выдел
енный
компонент имел чистоту
95
-
97 % (по данным ВЭЖХ)
[
98
].








30
)





31
)



32


Проведено успешное разделение этилаце
татного экстракта косточек
европейского винограда
Vitis vinifera

L
. в системе
гексан:этилацетат:этанол:вода в соотношении (1:8:2:7, об./об.). При этом
получены две фракции: первая содержащая около 75 % флавоноловых
мономеров


катехин и эпикатехин (18 % в
пересчете на массу экстракта),
вторая содержащая фракцию В
-
димеров (22 % в пересчете на массу
экстракта). При разделении экстракта стеблей винограда авторами выделена
фракция стильбенов, состоящая из ресвератрола (
33
) и его олигомеров (12 %
от массы экстра
кта), из которой, при использовании той же системы
растворителей, но при соотношении 4:5:3:3 (об./об.) выделен транс
-

R
1

R
2

R
3


27


Glc

β
-
(6
-
Ac)Glc

Ac


28


Glc

H

H


29


H

H

H



34

ресвератрол (
33
) с чистотой более 90 % (выход 7 % в пересчете на массу
экстракта)

[
99
].





33


Авторами
[
10
0
] разработан способ, который использует преимущества
кислотных свойств разделяемых веществ, для одновременного разделения
тритерпеноидных сапонинов и гликозидных флавоноидов из солодки с
применением пр
отивоточной хроматографии с контролем показателя рН. В
верхний органический слой (стационарная фаза) системы этилацетат:н
-
бутанол:вода (2:3:5, об./об.) приливали 10 мM трифторуксусной кислоты и
10 мМ аммиака в нижний водный (подвижная фаза). При этом
при
разделении этанольного экстракта выделены три тритерпеноидных сапонина
и гликозиды флавоноидов сапонин А3 (
34
), глицирризиновая кислота (
35
), 3
-
O
-

-
D
-
глукуропиранозил
-
(1→2)
-
β
-
D
-
галактопиранозил] глицирретовой
кислоты (
36
), апиозид ликуиритина (
37
) и л
икуиритин (
38
).






34
) ⠀
35



(36⤀









37







38



Авторами [
101
]

при раздел
ении водно
-
спиртового экстракта

Flaveria
bidentis

(L.) Kuntze методом противоточно
й хромато
графии выделен сульфат
-
3
изорамнетина

39
).

Разделение экстракта первоначально проводили на

35

стеклянной колонке с макропористой смолой
D4020

сначала водой, затем
90% этиловым спиртом. Элюат упарили и разделяли на противоточном
хроматогрфе в системе раствори
телей
н
-
бутанол
-
этилацетат
-
вода (4:1:5,
об./об.), при этом выделен
сульфат
-
3
изорамнетина (
39
) с чистотой 93,4 %.
Применение в качестве системы растворителей смесь н
-
бутанола и 0,25 %
раствора хлорида натрия
(1:1, об./об.) даже без первичной обработки
экст
ракта позволил получить сульфат
-
3 изорамнетина (
39
) с

чистотой 97 %,
выход составил
0,55 % в пересчете на экстракт.









39


На основе имеющихся в литературе данных можно с
делать
следующее заключение:

1 Технологии выделения и очистки биологически активных веществ
фл
авоноидов



субстанций лекарственных препаратов


достаточно долгий,
трудоемкий многостадийный процесс, требующий использования большого
количества дорогостоящих,

зачастую, токсичных органических
растворителей.

2 Центробежная хроматография распределения обеспечивает высокую
скорость разделения, не требует применения твердых сорбентов и
дорогостоящих элюентов, использование растворителей сокращается в 10
раз, что

значительно снижает себестоимость целевых продуктов. Поскольку
ЦХР обеспечивает эффективное разделение веществ механизмом, который
полагается исключительно на распределение веществ между растворителями,
основой успешного разделения данным методом является

правильный выбор
хроматографической системы растворителей и требует индивидуального
подхода к каждому объекту разделения.


36

Поэтому разработка эффективных, экономичных и экологически
безопасных технологий выделения и очистки ф
армакологически активных
флавон
оидов



источников новых оригинальных лекарственных
фитопрепаратов, с применением современных хроматографических методов,
является актуальной и приоритетной задачей.

Растения семейства ивовых (
Salicaceae
) и, в частности рода
Populus

L
.
(тополь), являются п
ерспективными источниками многих биологически
активных веществ.

Тополи насчитывают 30 видов. Большинство этих видов
широко распространены на территории СНГ, из них 15 видов встречаются в
Казахстане, которые интересны по своему многообразию, запасам и
возм
ожностям практического применения в народном хозяйств
е Республики

[
10
2
]
.


Большую группу фармакологических соединений изучаемых видов
тополей составляют флавоноиды, которые еще называют полифенолами и
биофлаваноидами, куда входят флавоны, флавонолы, флаван
оны, халконы,
катехины, антоцианы, изофлаваноиды, биофлаваноиды [1
0
3
]
.

Примечательно, что почки тополя лавролистного по флавоноидному
составу особенно близки к почкам тополя черного, за исключением
пинобанксина. При этом важно подчеркнуть, что основные фла
воноиды в
почках тополя лавролистного, как и в случае тополей черного,
дельтовидного [1
0
4
] и бальзамического [1
0
5
], представлены хризином,
пиностробином и пиноцембрином, причем для последнего описана
выраженная антимикробная и противогрибковая активности [
1
06
].

Физиологическая активность суммарных препаратов из тополей в оп
-
ределенной степени связана с присутствием в них органических кислот:
яблочной, лимонной, виннокаменной и др. Многие из них проявляют ан
-
тисептическую (например, бензойная, салициловая),

желчегонную
(производные кофейной кислоты), детоксицирующую (урановые кислоты)
способность тормозить превращение углерода в жир (виннокаменная ки
-
слота), противовоспалит
ельную (антикоричные кислоты) [
1
0
7
]
.



37

К сожалению, на сегодняшний день единичны случаи

применения
отдельных индивидуальных флавоноидов
-

монопрепаратов в медицинской
практике
,

несмотря на их широкое разнообразие, возобновляемость
источников и доступность их получения. В связи с этим ранее нами на
основе доступного флавоноида
-

пиностробина
,

получено новое производное
-

оксим пиностробина, обладающий более выраженной биологической
активностью в сравне
нии с исходным флавоноидом

[
108
].

Таким образом, обобщая результаты, считаем перспективным
проведение
работ

в плане разработки
эффективной, эко
номичной и
экологически безопасной технологии выделения и очистки пиностробина

из
почек

топол
я бальзамического
, с последующим синтезом

оксима
пиностробина и
создание
м на его основе отечест
венного
высокоэффективного фитопрепарата
.

Заключение по 1 главе

Так
им образом,
флавоноиды относятся к числу чрезвычайно широко
распространенных растительных метаболитов. Для более 7500 флавоноидов,
относящихся к нескольким десяткам структурных типов, описана точно
установленная структура молекул. Всесторонним исследование
м
флавоноидов, включающим помимо установления структуры раскрытие их
полезных свойств, в частности фармакологической активности, занимаются
ученые крупных научных школ во многих странах мира. Интерес к этим
соединениям постоянно растет, чему в немалой степ
ени способствуют такие
исключительно ценные свойства флавоноидов, как антиоксидантная
активность и связанная с ней способность многих метаболитов этого класса
действовать в качестве агентов, предотвращающих или тормозящих
образование опухолей, укрепляющих
кровеносные сосуды, защищающих
печень и желудочно
-
кишечный тракт, стимулирующих работу мозга и
сердца, являющихся биологически активными добавками в лечебном и
диетическом питании.


38

Например, в действующий Государственный реестр лекарственных
средств России

включено свыше 260 видов лекарственного растительного
сырья и более 600 препаратов растительного происхождения. Большой
интерес среди них представляют источники фенольных соединений и
полисахаридов. На их основе создана значительная часть лекарственных
ср
едств природного происхождения с широким спектром
фармакологического действия: сосудоукрепляющего, желчегонного,
карднотонического, антимикробного, гепатопротекторного,
противовоспалительного, антиоксидантного, противоопухолевого,
иммуномодулирующего, фарм
акосанирующего и другого, для лечения и
профилактики ряда заболеваний.

Поэтому исследования, направленные на изучение природных
источников фенольных соединений, изучение их химического состава,
фармакологического действия, стандартизация сырья, расширение

сырьевой
базы используемых в медицинской практике лекарственных растений для
создания на их основе фитопрепаратов являются актуальной задачей.



39

ГЛАВА

2

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ



Материалы и методы, использованные для проведения научных
исследован
ий, соответствуют требованиям ОФС Государственной
Фармакопеи Республики Казахстан,
European

Pharmcopoeia
,
United

States

Pharmacopeia
,
British

Pharmacopeia
, ФС, ВФС и других нормативных
документов, действующих на территории Республики Казахстан.


2.1
.

Матер
иалы исследований


В качестве материалов использованы:
почки тополя бальзамического

Populus balsamifera

L.

,

СО
2
-
экстракт

почек

тополя бальзамического
,

субстанция пиностробина, субстанция оксима пиностробина,

«Оксим
пиностробина 50 мг, капсулы»
.

Вспомога
тельные вещества

Крахмал

C
6
H
10
O
5

n
, синтезируемый разными растениями в
хлоропластах, под действием

света

при
фотосинтезе
, несколько различается
по структуре зёрен, степени полимеризации молекул, строению полимерных
цепей и физико
-
химическим свойствам.



Безвкусный аморфный порошок

белого цвета
, нераство
римый в
холодной воде. Под микроскопом видно, что это зернистый порошок; при
сжатии порошка крахмала в руке он издаёт характерный скрип, вызванный
трением частиц.

Кальция стеарат,

порошок белого со слегка желтоватым оттенком
цвета, практически не растворим

в воде очищенной и 96 % спирте

Применяется как вспомогательное вещество в производстве
лекарственных препаратов.

Лактоза безводная

(4
-
О
-

-
D
-
галактопиранозил)
-
D
-
глюкопираноза)


40

d
4
20
1,5254, Т
пл
223 °С.

Белый или почти белый прозрач
ный порошок. Легко, но медленно
растворим в воде, практически не растворим в спирте этиловом 96 %.

Магния карбонат основной.

Тонкий порошок белого цвета, без запаха
и вкуса. Не растворим в воде очищенной, растворим в разбавленных
кислотах.

Повидон

(Пласдон

K29/32), ISP, Швейцария. Низкомолекулярный
поливинилпирролидон. Используется как связующее вещество.

Натрия лаурилсульфат

(SDS),
Merck
, Германия. Используется как
поверхностно
-
активное вещество, солюбилизатор труднорастворимых
субстанций.

Полоксамер

Kolli
phor P188 micro, BASF, Германия. Неионогенное
ПАВ, сополимер полиоксиэтилена и полиоксипропилена, используется для
улучшения растворения труднорастворимых субстанций лекарственных
веществ за счет наличия в формуле гидрофобной и гидрофильной
составляющих

С
п
ирт этиловый

96 %
.

C
2
Н
5
ОН. (
M
r

46.07).

Прозрачная, бесцветная,
подвижная, летучая жидкость с характерным запахом и жгучим вкусом.
Легко воспламеняется, горит синеватым слабо светящимся бездымным
пламенем, смешивается во всех соотношениях с водой, эфиром,
х
лороформом, ацетоном и глицерином (ГФ РК

с. 419). Спирт этиловый
широко используется в качестве растворителя и экстрагента.


Вода очищенная

[ГФ РК, т. 1, с. 347, ФС 42
-
465
-
02]. Н
2
0. М.м. 18.

Бесцветная прозрачная жидкость без запаха и вкуса. Т
кип
=100
о
С, Т
пл
= 0
о
С,
d
4
20
1,0 г/см
3
.

В экспериментальных исследованиях использованы химические
реактивы и растворители квалификации «о.с.ч.», «х.ч.», «ч.д.а.».

Гептан.

С
7
Н
16
. (
M
r

100.2). 1042000. [142
-
82
-
5].


41

Бесцветная, воспламеняющаяся жидкость. Практически не раств
орим
в воде, смешивается с этанолом

(ГФ РК

с. 348). Гептан используется в
качестве растворителя.

Гексан.

С
6
Н
14
. (
M
r

86.2). 1042600. [110
-
54
-
3].

Бесцветная, воспламеняющаяся жидкость. Практически не растворим
в воде, смешивается с этанолом (ГФ РК

с. 348). Г
ексан используется в
качестве растворителя.

Этилацетат.

С
4
Н
8
О
2
. (
M
r

88.1). 1035300. [141
-
78
-
6].

Прозрачная, бесцветная жидкость. Растворим в воде, смешивается с
96 % спиртом

(ГФ РК

с. 448). Этилацетат используется в качестве
растворителя.

Ацетонитрил.

С
2
Н
3
N
. ⠀
M
r

41.05). 1000700. [75
-
05
-
8]. Метилцианид.
Этаннитрил. Прозрачная, бесцветная жидкость. Смешивается с водой,
ацетоном и метанолом.

(ГФ РК

с. 339). Этилацетат используется в качестве
растворителя.


2.2
.

Методы исследований

Физико
-
химические и фармацевт
ические исследования проведены с
использованием следующих приборов: потенциометр рН
-
150 МИ (Россия),
аналитические весы «Sаrtorius» (Германия), набор мерной посуды фирмы
“Simax” (Чехия), спектрофотометр «Helios
-
β» (Великобритания)
,

спектрометр «Termo Nicol
et Avatаr
-
360» (США), жидкостный хроматограф
Agilent 1100 Series (США),

спектрометр «
JEOL

ECA

500
M
Н
z
», «
Bruker

АМ
-
300»,
лабораторный экстрактор УСФЭ
-
5/2, экстракционная установка УЭ
-
1,
быстрый

центробежный хроматограф распределения
FСРС А200, FСРС 5000
,
п
рибор для определения температуры плавления «Boetius» (Германия),
установка для получения капсулированных форм марки «JTJ
-
100A»,
смеситель
V
-
образный марки «
V
-
20», влажный гранулятор для получения
гранул марки

HLSG
-
10, сушильный шкаф полочный марки

«
СТС
-
0
», тестер
для определения распадаемости марки «ERWEKA ZT 504» (Германия),

42

тестер для определения растворения «Вращающаяся корзинка» марки
«ERWEKA ZT 504» (Германия).



Физико
-
химические методы

Центробежная хроматография распределения

Разделение
СО
2
-
экстр
акта
почек тополя бальзамического

проведено

на установке
F
СРС
-
А200, ротор 250 мл, система растворителей
гексан:этилацетат:ацетонитрил:вода (
6
:
4
:
5
:
4
), проба 2,3 г в 15 мл


верхней
(стационарной) фазы и 10 мл


подвижной фазы, 25 мл пробы ввели в
хроматогра
ф, УФ
-
детектирование
289
нм, скорость вращения ротора


1400
об/мин, метод разделения двойной


элюирование и экструзия.

Препаративная
высокоэффективная жидкостная
хроматография

Разделение
СО
2
-
экстракта
почек тополя бальзамического
, содержащей
пиностробин
,

проводили на препаративной установке
HPLC

с применением
обращенно
-
фазового варианта
ВЭЖХ с использованием препаративной
колонки 9,1х250 мм, заполненной сорбентом
Microsorb

60
-
8
C
18, с размером
частиц 10 мкм, состав подвижной фазы: смесь ацетонитрил
-
вода
-
к
ислота
уксусная 1%
(50:49:1
). При объемной скорости подачи элюента 4 мл в
минуту полное разделение пробы происходит в течение 30 минут,
температура колонки комнатная. УФ
-
детектирование при 2
8
9

нм.

Высокоэффективная жидкостная хроматография

Определение коли
чественного содержания

пиностробина в
почках
тополя бальзамического
,
СО
2
-
экстракте

почек

тополя бальзамического
,
субстанции пиностробина
, фракциях после разделения

СО
2
-
экстракте

почек

тополя бальзамического

на установке
FCPC

проводили на жидкостном
хромато
графе


PACKARD

Agilent

1100
Series

в изократическом
режиме. В качестве стационарной фазы использовали аналитическую
колонку 4,6х150 мм, заполненную сорбентом
Zorbax

SB
-
C
18

(5 μм);
подвижная фаза: ацетонитрил



вода

-

уксусная кислота 50:49:1

(об/
об)
,

43

скорость подачи элюента 1,0

мл/мин, объем вводимой пробы 20 мкл.
УФ
-
детектирование при 289

нм.
Обсчет данных производили с использованием
программного обеспечения
ChemStation
.

Количественное содержание

оксима пиностробина

в субстанции
оксима пиностробина

и
лекарственном средстве
«Окси
м пиностробина
,
капсула, 50 мг»
, определяли
на жидкостном хроматографе

HEWLETT

PACKARD

Agilent

1100
Series

в изократическом режиме.
В качестве
стационарной фазы использовали аналитическую колонку 4,6х150 мм,
заполненную сорбе
нтом
Zorbax

SB
-
C
18

(5 μм); подвижная фаза: ацетонитрил


уксусная кислота 50:
50

(об/об), скорость подачи элюента 1,0 мл/мин, объем
вводимой пробы 20 мкл. УФ
-
детектирование при 280 нм.

Обсчет данных
производили с использованием программного обеспечения
Chem
Station
.

Идентификация исследуемых компонентов основана на сравнении
времени удерживания со временем удерживания стандар
тных образцов
пиностробина и оксима пиностробина.

Для подтверждения достоверности
идентификации анализируемого вещества использован мето
д добавок.

ИК
-
спектроскопия

ИК
-
спектры образцов
субстанций пино
стробина и оксима
пиностробина
регистрировали на спектрометре «
Termo

Nicolet

Avat
а
r
-
360»
(США) в
таблетках с к
алия бромидом, в области от 4000 до 500

см
-
1
.

УФ
-
спектрофотометрия

УФ
-
спектры обра
зцов
субстанций пиностробина и оксима
пиностробина

снимали на приборе
«
Helios
-
β» (Великобритания), в области от
190 до 350

нм.

Химические методы:

К 0,1
г образц
а прибавляют 1 мл 95 % спирта
этилового, 0.5 мл кислоты хлороводородной концентрированной и 0.1

г
порошка магния металлического, появляется розовато
-
красное окрашивание
(флавоноиды).


Фармакопейные методы



44

-

определение цвета, вкуса, запаха
субстанций пиностробина и оксима
пиностробина; стандартного образца пиностробина

проводили по методике,
изложе
нной в ГФ РК, Т. 1, с. 548;

-

определение растворимости
субстанций пиностробина и оксима
пиностробина; стандартного образца пиностробина

в различных
растворителях проводили

по методике ГФ РК, Т. 1.

с. 175;

-

определение температуры плавления
субстанций пин
остробина
и
оксима пиностробина
про
водили по методике ГФ РК, Т. 1.
;

-

определение средней массы, распадаемости

капсул оксима
пиностробина

проводили по ГФ РК, Т. 1, с. 244;

Биофармацевтические методы

Для фармацевтической оценки качества капсул
оксима пинос
тробина

по тесту «Растворение» испыт
ания проводили согласно методик

описанной в
ГФ РК, Т.1
.

Микробиологический метод

Испытание на микробиологическую чистоту

субстанций
пиностробина и оксима пиностробина

и готовой лекарственной формы в
капсулах проводили п
о мето
дике, изложенной в ГФ РК, Т.1.

и на основании
руководства «Методы микробиологического контроля лекарственных
средств», Алматы, 2000 г
.


Статистическая обработка результатов

При обработке полученных результатов исследований применен
метод вариационно
-
статистического анализа с использованием критерия
достоверности по Стьюденту (Р<0,95). Для определения спецефичности,
линейной зависимости, правильности и воспроизводимости методики
проведена валидация аналитических методик количественного определения
акти
вных компонентов и родственных примесей в лекарственных
препаратах
в соответствии с ОФС.


45

ГЛАВА

3

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ

СУБСТАНЦИИ

ПИНОСТРОБИНА

И
ЕЕ

СТАНДАРТИЗАЦИЯ



3.1
.

Определение сыр
ь
евых запасов тополя бальзамического


Тополь бальзамический

Populus
balsamifera

L.) сем.
Ив
о
вых

Salicaceae
) распространен в Северной Америки, Канаде и северных штатах.
Культивируется в России, на Кавказе и Средней Азии. Бальзамический
тополь в Казахстане растет повсеместно и является перспективным
возобновляемым источнико
м биологически активного флавоноида
пиностробина.

Общая площадь лесов в Северо
-
Казахстанской области составляет
542,7 тыс. га, что составляет 5,5% от общей площади территории. Основная
масса тополя бальзамического расположена в полезащи
т
ных полосах,
площа
дь которых составляет 504,16 тыс. га. В приг
о
роде областного центра
имеется зеленая зона


4,697 тыс. га. Вблизи поселка Прибрежное в
экологически чистой зоне располагается лесоучасток тополя бальзамического
-

2,5 га, где проводится сбор почек для нау
ч
но
-
и
сследовательских работ в
количестве 400 кг. Перспектива промышленной заготовки сырья составляет
более 4 т.
Годовой прирост тополевых насаждений 15
-
20 м
3
/га.

Ранее
р
азработан и утвержден ВАНД

РК 42
-
492
-
12
на
почки тополя
бальзамического
, который составлен н
а основании результатов анализов трех
партий сырья, в соответствии с требованиями ГФ РК

[
109
].


3.2
.

Подбор оптимальных условий углекислотной экстракции
почек тополя бальзамического

для количественного извлечения
пиностробина

До последнего времени основу т
ехнологии извлечения биологически
активных соединений из растительного сырья, которые являются

46

действующим началом фитопрепаратов, составляли традиционные способы
-

экстракция органическими растворителями (хлороформ; этиловый спирт и
другие), удаление балл
астных веществ и последующее хроматографическое
разделение полученных экстрактов методом колоночной хроматографии с
использованием бензола, петролейного и диэтилового эфиров, этилацетата и
других.

В целом технологии производства лекарственных препаратов
р
астительного происхождения характеризуются многостадийностью,
использованием дорогостоящих, легковоспламеняющихся, токсичных
органических растворителей (хлороформ, бензол, петролейный эфир, гексан,
ацетон и др.). Указанные особенности производственных цикл
ов получения
данных препаратов, безусловно, отражаются в конечном итоге на
себестоимости продукции и вызывают ее удорожание. С другой стороны,
применение токсичных растворителей на отдельных этапах
производственного регламента не допускается по международн
ым
стандартам GMP, что снижает конкурентоспособность выпускаемой
фармацевтической продукции и препятствует ее выходу на внешний рынок.

Поэтому разработка эффективных, экономичных и экологически
безопасных технологий выделения и очистки фармакологически акт
ивных
веществ


источников новых оригинальных лекарственных фитопрепаратов,
является актуальной и приоритетной задачей.

Ранее для получения пиностробина и сопутствующих флавоноидов
применяли экстракцию
почек тополя бальзамического


Populus balsamifera

L.
)
96 % этиловым спиртом [11
0
].

Извлечение 96 % этиловым спиртом
суммы экстрактивных веществ

сложного состава
, создавало значительные
трудности для выделения и очистки пиностробина, что существенно снижало
его выход. Поэтому с учетом физико
-
химических свойств

пиностробина
осуществлена
сверхкритическая углекислотная экстракция
почек тополя
бальзамического, направленная на количественное извлечение пинос
тробина
из растительного сырья.


47

Проведена сверхкритическая углекислотная экстракция
почек тополя
бальзамическо
го


Populus balsamifera

L.


с изменением технологических
параметров: давления, температуры, продолжительности процесса

экстрагирования

растительного сырья.

Определены оптимальные условия
сверхкритической флюидной экстракции

почек тополя бальзамического
, пр
и
которых достигается количественный выход флавоноида пиностробина.

Для экспериментов использовали сырье почек тополя
бальзамического

собранных в
Северо
-
Казахстанской

обл.,
пос. Прибрежное.

Н
а первом этапе изучения определена

зависимость
извлечени
я

пинос
тробина из почек
тополя бальзамического

от давления (табл
.
3.2.1⤀
,
содержание пиностробина в СО
2

экстрактах определяли методом ВЭЖХ.


Таблица
3.
2
.1

-

Р
езультаты экспериментов изучения динамики
экстрагирования пиностробина из

почек тополя бальзамического

в

зависимости от давления



экспери
-
мента


Параметры

экстрагирования

Выход экстракта

Содержание
пиностробина

давление,
МПа

время,
мин

темпе
-
ратура, °С

г

%

г

%

1

10

1
8
0

60

5,4

2,7

0,85

15,66

2

15

1
8
0

60

12,7

6,35

2,14

16,87

3

20

1
8
0

60

33,2

16,60

8
,32

25,10

4

25

1
8
0

60

33,0

16,50

7,50

22,73

5

30

1
8
0

60

32,8

16,40

6,90

21,04

6

35

1
8
0

60

32,6

16,30

6,32

19,38


Как видно из полученных результатов, повышение давления с 10 МПа
до 20 МПа при экстрагировании приводит к увеличению выхода
СО
2

экстракта и

содержания в нем пиностробина. Дальнейшее повышение
давления
с 20 МПа до 35 МПа в ходе экстракции не оказывает

48

существенного влияния на выход

СО
2

экстракта, но приводит к снижению
содержания пиностробина в нем.


Таким образом, в

ходе проведенного эксперим
ента установлено, что
количественное извлечение пиностробина из
почек тополя бальзамического

-

91,0 %,

наблюдается при
давление

20 МПа, при этом выход
СО
2
-
экстракта
составляет 16,6 % с содержанием пиностробина 25,1 %.

На следующем этапе подбора оптимальн
ого режима
СО
2
-
экстракции
почек тополя бальзамического
определяли
влияние продолжительности

экстрагирования на извлечение пиностробина
(табл
.

3
.2.2
).


Таблица

3
.2.2

-

Р
езультаты изучения выхода экстракта и пиностробина из
почек тополя бальзамического

в зав
исимости от времени экстракции




экспери
-
мента


Параметры экстрагирования

Выход экстракта

Содержание

пиностробина

давление,
МПа

температура,

°С

время,

мин

г

%

г

%

1

20

60

90

35,0

3,5

10,0

28,6

2

20

60

120

37,6

3,8

11,4

30,2

3

20

60

150

40,4

4,0

12,5

31,0

4

20

60

180

45,6

4,6

13,5

29,6

5

20

60

210

46,0

4,6

13,5

29,4

6

20

60

240

46,1

4,6

13,5

29,3


Как показывают результаты экстракции сырья почек тополя
бальзамического в зависимости от продолжительности процесса, наиболее
оптимальным давлением
при экспериментальном исследовании, является
180 минут, способстующий увеличению выхода экстракта и извлечению
содержания пиностробина в нем до 29,6 % .

Для выяснения влияния фактора темературы на количественный
выход экстракта и действующего вещества
пиностробина проведено
следующее исследование,

результаты которого представлены в таблице

3.2.3
.


49

Таблица
3
.2.3

-

Динамика выхода экстракта и пиностробина в зависимости от
температуры экстракции




экспери
-
мента


Параметры экстрагирования

Выход
экстракта

С
одержание

пиностробина

давление,
МПа

температура,

°С

время,

мин

г

%

г

%

1

20

50

180

26,0

2,6

6,3

24,0

2

20

55

180

35,6

3,3

8,9

27,2

3

20

60

180

38,8

3,9

12,0

30,9

4

20

65

180

45,6

4,6

13,8

30,2

5

20

70

180

45,9

4,6

13,6

29,7


В
ходе
эксперимента в
ыявлено, что увеличение температуры
экстракции с 50

до 60°С

обеспечивает повышение выхода
СО
2
-
экстракта и
количественное содержание пиностробина в нем.
У
величение
температуры
экстракции
с
65

до
70°С

приводит к незначительному
повышению

выход
а

СО
2

экстракта
, но
при этом существенно снижается

содержания
пиностробина в нем.

Таблица
3.2.4



Параметры оптимального

режим
а

СО
2
-
экстракции
почек
тополя бальзамического
, обеспечивающего

количественное извлечение
пиностробина



Режим экстракции

Выход
СО
2
-
экстракта и

к
оличественное содержание пиностробина

давле
-
ние,
МПа

темпе
-
ратура,
°С

время,
мин.

полнота
извлечения
пиностробина,
%

выход
экстракта

содержание
пиностробина

в экстракте

остаточное
содержание
пиностробина
в шроте

г

%

г

%

г

%

20

60

180

91,0

33,2

16,
60

8,32

25,10

0,81

0,41


Таким образом, в результате проведенной экспериментальной работы
определены оптимальные параметры процесса экстрагирования сырья почек

50

тополя бальзамического, с применением
сверхкритической углекислотной
экстракции, обеспечивающее

количественное извлечение пиностробина из
растительного сырья.


3.3
.

Разработка нового способа выделения и очистки
пиностробина из СО
2
-
экстракта
почек тополя бальзамического

с
применением современных хроматографических методов


Для разделения суммы флавон
оидов обычно используют колоночную
хроматографию на силикагеле, полиамидном сорбенте, сефадексе LН
-
20,
целлюлозе. Элюирование веществ проводят с помощью хлороформа, а затем
смеси хлороформа с метиловым или этиловым спиртами в градиентном
режиме, то есть с
возрастающей полярностью элюентной смеси (обычно в
диапазоне концентраций спиртов 1
-
30 %). Для выделения индивидуальных
флавоноидов используют рехроматографию, перекристаллизацию или
специфические методы [1
1
1
].


Ранее для наработки пиностробина применялись

следующие способы:

-

Воздушно
-
сухие почки тополя бальзамического, массой 400 г
трехкратно экстрагировали на аппарате «
C
окслет» 95 %
-
ным этиловым
спиртом. Экстракты объединяли, фильтровали и упаривали на ротационном
испарителе под вакуумом. Получили 100 г гу
стой темно
-
желтой массы.

Полученный экстракт хроматографировали на колонке с силикагелем
марки КСК 0,31
-
0,63 мкм, используя в качестве элюентов смеси: 1)
петролейный эфир, 2) петролейный эфир
-
бензол, 3) бензол
-
этилацетат в
различных соотношениях.

Далее, ид
ентичные по составу фракции объединяли и
хроматографировали на флеш
-
колонке при соотношении массы фракции и
адсорбента 1:50. Системы для флеш
-
хроматографии: петролейный эфир


бензол: 1) 7:3, 2) 9:1, и бензол
-
этилацетат: 3) 8:2, 4) 4:6.


51

В результате хромат
ографического разделения получают 11,2 г
пиностробина. Выход пиностробина составляет 2,8 %, в пересчете на
воздушно
-
сухое сырье [
11
2
].


Свежесобранные почки тополя бальзамического экстрагировали
водным спиртом, полученный экстракт упаривали в вакууме до гу
стого
остатка и последовательно хроматографировали на различных сорбентах
.
При этом выделен пиностробин

в виде кристаллов игольчатой формы [
11
3
].

Как видно из вышеизложенного, способы выделения и очистки
пиностробина характеризуются многостадийностью, испо
льзованием
дорогостоящих, легковоспламеняющихся, токсичных органических
растворителей (бензол).

Основным недостатком технологии извлечения пиностробина из
почек тополя бальзамического является хроматографическое разделение
экстракта методом колоночной хро
матографии, которая характеризуется
низкой скоростью разделения, невысокой производительностью и
значительной трудоемкостью, требуют применения твердых сорбентов и
значительного количества токсичных органических растворителей.

При этом
наработка 60 г пинос
тробина занимала порядка 10 рабочих дней.

Поэтому разработка и внедрение в производство новой технологии
получения пиностробина и сопутствующих флавоноидов из экстракта почек
тополя бальзамического является актуальной задачей.

В последние годы для получени
я флавоноидов успешно применяют
современные автоматизированные виды препаративной жидкостной
хроматографии, а именно, центробежную хроматографию распределения и
противоточную хроматографию, которые обеспечивают высокую скорость
разделения, не требуют приме
нения твердых сорбентов и дорогостоящих
,
токсичных

элюентов.

Для

р
азработки эффективного и экологически безопасного способа
препаративной наработки пиностробина нами впервые проведена апробация

52

современных хроматографических методов,

а именно, центробежной

хроматографии распределения.

Центробежная хроматография распределения (P)
-

отличная
альтернатива, чтобы избежать проблем, связанные с твердофазными
адсорбентами и сохранить химическую целостность смесей, подвергаемых
разделению. С учетом этих преимущес
тв она получает все большую
популярность как инструмент очистки природных соединений, и особенно
для разделения растительных экстрактов.

Поскольку основой успешного разделения с применением
центробежной хроматографии распред
еления (ЦХР) является правильным

выбор
ом

хроматографической системы растворителей, работ
а

нача
то

с
подбора оптимальной системы растворителей, котор
ые

обеспеч
а
т
количественный выходы качественного целевого продукта.

Изначально
проведен подбор системы растворителей для разделения
на устано
вке
FCPC
-
А200

СО
2
-
экстракта
почек тополя бальзамического, при
этом
использова
ны

следующие смеси растворителей:

1) гептан:этилацетат:ацетонитрил (2:1:2);

2) гептан:этилацетат:ацетонитрил (4:1:4);

3) гептан:
этилацетат:ацетонитрил:вода (4:1:
4:1);

4) гептан:э
тилацетат:ацетонитрил:вода (6:
1:
6:1);

5) гептан:
этилацетат:ацетонитрил:вода (2:1:
2:1⤀
;

6) гексан:этилацетат:ацетонитрил:вода (6:4:5:4).

Двухфазная система для разделения СО
2
-
экстракта
почек тополя
бальзамического

подобрана согласно коэффициенту распределен
ия (K)
пиностробина, между

двумя не смешивающимися фазами.

З
начение К
пиностробина оценивали по анализу методом ВЭЖХ. Оптимальной системой
растворителей для выделения пиностробина из СО
2
-
экстракта
почек тополя
бальзамического

определена смесь
гексан:этилац
етат:ацетонитрил:вода
(6:4:5:4⤀
, в качестве подвижной фазы использован нижний слой системы.


53

Проведено экспериментальное разделение
СО
2
-
экстракта почек
тополя бальзамического

на установке FP
-
А200

с использованием системы
растворителей ге
к
с
ан:этилацетат:ац
етонитрил:вода (6:4:5:4), разделение
проводилось двойным методом: элюирование и экструзия,
при этом
получено 60 фракций.

Фракции, содержащие пиностробин (49
-
58) (по данным ТСХ)
объединили и упарили, затем перекристаллизовали из гексана и получили
пиностро
бин с чистотой 99,18 % по данным ВЭЖХ, выход составил
14
,0 % в
пересчете на массу экстракта почек тополя.

Экспериментально установлено, что оптимальным способом для
выделения и очистки пиностробина из
СО
2
-
экстракта
почек тополя
бальзамического, обеспечива
ющим количественный выход качественного
целевого продукта, является центробежная хроматография распределения.


3.4
.

Разработка технологии субстанции пиностробина с
применением центробежной хроматографии распределения


Для повышения производительности, авт
оматизации, уменьшения
продолжительности технологического процесса и исключения токсичных
растворителей разработана
эффективная, экономичная, экологически
безопасная технология получения

метоксилирован
н
ого флавоноида
пиностробина

с применением центробежной

хроматографии распределения.


3.4.1
.

Подбор оптимальных условий выделения и очистки
субстанции пиностробина


Выделение пиностробина из СО
2
-
экстракта
почек тополя
бальзамического

проводится в два этапа: очистка с применением
производственной установки
FCPC
-
5000 (быстрый центробежный
хроматограф распределения) и последующей перекристаллизацией

54

технического пиностробина.

Для выполнения первого этапа очистки изучено влияние ряда
технологических факторов, влияющих на выход целевого продукта, а
именно, массы и р
астворителя вводимой пробы, скорост
ь

подачи подвижной
фазы и
скорость вращения ротора (рис
.
3.4.1.1.
-
3.4.1.
4), проведен ряд
экспериментов для определения оптимального режима разделения СО
2
-
экстракта
почек тополя бальзамического
, обеспечивающего количественн
ый
выход качественного целевого продукта
-

пиностробина.

Для определения оптимального количества СО
2
-
экстракта
почек
тополя бальзамического

для одного разделения
,

в производственную
установку
FCPC
-
5000

вводили 1
0,
20, 30, 40, 50, 60 и 7
0 г СО
2
-
экстракта,

о
бъем вво
димой пробы составлял

700 мл.

При введении
10, 20, 30, 40, 50
г
происходит эффективное разделение
СО
2
-
экстракта, выход пиностробина

в среднем 8

г, что составляет
16,0 %

в
пересчете на массу СО
2
-
экстракта
почек тополя бальзамического
. В ходе
разделе
ни
я проб, содержащих 60 и 7
0 г СО
2
-
экстракта, наблюдается
уменьшение выхода целевого продукта до
4,7

г

(7,8 %) и 4,2

г

⠀6,0

%⤀
соответственно, что связано со снижением разрешения хроматографического
процесса, то есть ухудшением разделения компонентов смеси
, вследствие
введения в производственную установку
FCPC
-
5000 слишком большого
количества СО
2
-
экстракта

(рис
.3.4.1.1⤀
.

Для эффективного разделения компонентов и количественного
выхода пиностробина необходимо полное растворение 50 г СО
2
-
экстракта
почек топол
я бальзамического

в смеси подвижной фазы и стационарной
фазы. Поскольку максимально возможный объем вводимой пробы составляет
800 мл, нами апробированы смеси стационарной фазы:подвижной фазы в
объемном соотношении 100:600, 200:500, 300:500, 400:400, 500:30
0, 600:200,
700:10
0 и 800 мл стационарной фазы.



55


Рис
.

3.4.
1
.
1.

Зависимость выхода пиностробина от массы

вводимой пробы

В результате экспериментально установлено, что полное растворение
пробы и количественный выход

пиностробина (16

%) обес
печивает смесь
,
включающая

700 мл стационарной и 100 мл подвижной фазы.

Применение
других выше перечисленных смесей стационарной фазы и подвижной фазы

приводит к неполному растворению

СО
2
-
экстракта
, как следствие,
к
дополнительному фильтрованию п
робы и снижению выхода п
иностробина
(рис
.

3.4.
1.
2
).




Рис
.

3.4.1.
2
.

Зависимость выхода пиностробина от объема
стационарной фазы

в пробе

Скорость подачи элюента значительно влияет на качество разделения
смеси компонентов и продолжительность процесса
.

Поэтому
нами
приоведено

выде
ление

пиностробина

из СО
2
-
экстракта
почек тополя
бальзамического

со скоростью подачи элюента 10, 20, 30, 40, 5
0
, 60 и 70

мл/мин

(рис
.

3.4.
1.
3
⤀.


Рис.
3.4.
1.
3. Зависимость выхода пиностробина от скорости подачи
подвижной фазы


56

Как видно из полученных данны
х
, разделение со скоростью подачи
элюента 10, 20, 30, 40 мл/мин
занимает от 180 до 120 минут и значительно
снижает выход пиностробина. Увелечение скорости подачи элюента до 60 и
70 мл/мин значимо сокращает продолжительность разделения до 70 минут,
но и сущ
ественно снижает выход пиностробина.

К
оличестве
нный выход
целевого продукта (16

%) достигается при
скорости подачи элюента 50

мл/
мин, при этом

полное разделение вводи
мой пробы происходит в течение
90 мин
.

Скорость вращения ротора ок
азывает существенное вли
яние

на
смешивание и разделение стаци
онарной и подвижной фаз в ходе
хроматографирования
, то есть
, значимо влияет на эффективность

хроматографического процесса. Поэтом
у нами исследован количественный
выход пиностробина

при

разделении СО
2
-
экстракта
почек топ
оля
бальзамического со

скоростью

вращения ротора 800, 900, 1000, 1100 и 1
200
оборотов в минуту (рис
.

3.4.1.
4
).




Рис
.

3.4.
1.
4
.

Зависимость выхода пиностробина от скорости вращения
ротора

установки FP
-
5000

Разделение со скоростью вращения ротора 800 и 9
00 об./мин снижает
выход пиностробина.
Количественный выход целевого продукта (16 %)
обеспечивает разделение СО
2

экстракта
почек тополя бальзамического

со
скоростью вращения ротора 1000 оборотов в минуту. При скорости вращения
ротора 1100 и 1200 об./мин в
системе достигается максимальное давление и
происходит автоматическое снижение скорости подачи элюента, за счет чего
увеличивается время разделения и снижается выход пиностробина.


57

Таким образом, э
кспериментально установлено, что для выделения
пиностробина
из СО
2

экстракта
почек тополя бальзамического

оптимальными являются следующие условия

хроматографирования
: 50,0 г
СО
2

экстракта
почек тополя бальзамического

растворяют в 700 мл
подвижной и

100 мл стационарной фазы при тщательном перемешивании,
разделение п
роводится при скорости подачи элюента 50 мл/мин и скорости
вращения ротора 1000 об/мин, УФ
-
детектирование при 289 нм. Полное
разделение вводимой пробы происходит в течение 90 минут.

Отбор фракций проводят при помощи фракционного коллектора,
согласно получ
енной хроматограмме

разделения СО
2
-
экстракта

почек тополя
бальзамического (рис
.
3.4.
1.
5)
. Элюент отгоняют на роторном испарителе и
возвращают в цикл с минимальными потерями.

В результате разделения получают 4 фракции объемом от 250 до 1000
мл
,
растворитель

упаривают
,

получают пиностробин технический с
содержанием целевого продукта более 97 % (рис
.5

.




Рис
.

3.4.
1.
5
.

Хроматограмма разделения СО
2

экстракта
почек тополя

бальзамического
с применением FP
-
5000


Второй этап очистки включает в себя перекристал
лизацию

пиностробина из гексана.
Выход пиностробина с чистотой не менее 99,0 %
составляет 16,0 % в пересчете на массу
СО
2
-
экстракта

почек тополя
бальзамического

(2,8 % в пересчете на воздушно
-
сухое сырье).

Сравнение основных показателей технологий субстанц
ии
пиностробина с использованием колоночной хроматографии и с

58

применением центробежной хроматографии распредел
ения представлено в
таблице
3.4.
1.
1
.


Таблица
3.4.
1.
1

-

Сравнение основных показателей технологии субстанции
пиностробина с использованием колоноч
ной хроматографии (КХ) и с
применением центробежной хроматографии распределения (ЦХР)


Показатели

КХ

ЦХР

Эффективность

Временные затраты

20 рабочих дней

20 рабочих дней

-

Производительность

120 г (3 колонки по
250 г смолки)

300 г

Увеличена

в 2,5 раз
а

Выход продукта

(в пересчете на

СО
2
-
экстракт)


15,5 %



16,0 %



Увеличен

в 1,03 раза

Сорбент

Силикагель марки
КСК


1,6 кг

(используется
однократно)

Не используется

Не используется

Расход
растворителей

Петролейный эфир
-

56 кг,

этилацетат


8 кг


Геп
тан


8,4 кг,

ацетонитрил


6,4 кг,

этилацетат


9 кг,

дистиллированная
вода
-

8 кг

Снижен

в 2,7

раза;

исключен
дорогостоящий и
огнеопасный
петролейный эфир

Трудозатраты

6 человек


186

000 тг

2 человека


70

000 тг

Снижены

в 3 раза

Себестоимость 1

г
субстанции
пиностробина

2012 тенге


150 тенге


Снижена

в 3 раза


Эффективность разработанной технологии, при увеличении
производительности
в
2,5 раза, с учетом снижения трудозатрат в 3 раза,
позволила снизить себестоимость 1 г субстанции пиностробина
в 3 раза.


59

Таким образом, разработана эффективная, экономичная и
экологически безопасная технология получения субстанции пиностробина с
применением центробежной хроматографии распределения, позволяющая
нарабатывать в сутки до 40 г пиностробина с чистотой не

менее 99,0 %.


3.
5
.

Спецификация качества субстанции пиностробина


Поскольку необходим нормативный документ, регламентирующий
качество
субстанции пиностробин
а, разработан проект АНД, который
составлен на
о
сновании результатов анализов 3 серий опытной парт
ии, в
соответствии с требованиями ГФ
РК (табл
.

3.5.1
).


Спецификация качества включает в себя следующие показатели:

Определение
:

Пиностробин содержит не менее 98.0 % [5
-
гидрокси
-
7
-
метоксифлаванона]




С
16
Н
14
О
4

M
r

270,28


Стандартный образец пиностробина предназначен для
количественного определения в лекарственном растительном сырье и
лекарственных растительных препаратах.


Таблица
3.5.1



Показатели

качества субстанции пиностробина

Наименование
показателей

По проекту АНД

Результаты

010515

020515

030515

1

2

3

4

5

Описание

Кристаллический порошок белого цвета

Соответ
-
ствует

Соответ
-
ствует

Соответ
-
ствует

Растворимость

Растворим в хлороф
орме, эфире
диэтиловом, этилацетате, ацетоне, мало
ра
с
творим в 96 % этаноле, практически не
растворим в в
о
де.


Соответ
-
ствует

Соответ
-
ствует

Соответ
-
ствует


60

1

2

3

4

5

Подлинность

В области от 4000 см
-
1

до 500 см
-
1

должен
иметь полосы поглощения при 3091,

3057 (С
-
Н связи ароматических групп), 2934 (О
-
СН
3

при ароматической группе), 1650 (СО),
1622, 1574 (СС), 1343 (
-
СН
3
), 1317, 1255,
1155 (С
-
О
-
С), 1283, 1095, 890 см
-
1
(бензольное кольцо).

Ультрафиолетовый спектр поглощения
0.0005 % раствора образца в
95

% спирте
этиловом


в области от 190 до 450 нм должен
иметь максимум поглощения при

длине
волны (289±2) нм и при 325±2 нм.


Соответ
-
ствует

Соответ
-
ствует

Соответ
-
ствует

Температура
плавления,
0
С

От 97 до 99

97
-

98

97
-

99

96
-

97

Качественная
реакция
на
флавоноиды


К 0.1 г образца прибавляют 1 мл
95 %

спирта
этилового
, 0.5 мл кислоты хлороводородной
концентрированной и 0.1 г порошка
магния
металлического
, появляется розовато
-
красное окрашивание.

Соответ
-
ствует

Соответ
-
ствует

Соответ
-
ствует

Потеря в
массе
при
высушивании, %

Не более 0,5

0,35

0,42

0,31

Родственные
примеси

Не более 1,0 %

0,31

0,35

0,27

Количественное
определение

Не менее 97,0 %

99,20

99,20

99,30

Остаточные
растворители

Не более 0,5 %

0,03

0,02

0,03

Срок хранения


2 года

Соответ
-
ств
ует

Соответ
-
ствует

Соответ
-
ствует

Свойства:

Описание.

Кристаллический порошок белого цвета.

Температура плавления.

От 97°С

до 99°С.


61

Растворимость.

Растворим в хлороформе, эфире диэтиловом,
этилацетате, ацетоне, мало растворим в 96 % этаноле, практически
не
растворим в в
о
де.


Идентификация:

Инфракрасный спектр поглощения пиностробина, полученный
в
дисках с калия бромидом (3 мг в 300 мг калия бромида), в области от 4000
см
-
1

до 500 см
-
1
, должен иметь характеристические полосы поглощения при
3091, 3057 (С
-
Н

связи ароматических групп), 2934 (О
-
СН
3

при ароматической
группе), 1650 (СО), 1622, 1574 (СС), 1343 (
-
СН
3
), 1317, 1255, 1155 (С
-
О
-
С), 1283, 1095, 890 см
-
1

(бензольное кольцо).

Ультрафиолетовый

спектр 0.
0
005 % раст
вора пиностробина в
95 %
этаноле в обла
сти от 190 нм до 450 нм имеет максимум поглощения при
длине волны 289 ± 2 нм и при 325 ± 2 нм (плечо).

К 0.1 г образца прибавл
я
ют 1 мл
95%
спирта этилового, 0.5 мл
кислоты хлороводородной концентрированной и 0.1 г п
о
рошка магния
металлического, появляется
розовато
-

красное окраш
и
вание (флавоноид).

Испытания:

Родственные примеси.

Определение проводят методом
жидкостной
хроматографии (
2.2.29
),

используя метод
внутренней нормализации.

Испытуемый раствор.
5.0 мг СО пиностробина растворяют в 10 мл
ацетонитрила
при нагревании на водяной бане, охлаждают до комнатной
температуры и доводят тем же растворителем до объема 25.0 мл. Фильтруют
через мембранный фильтр с размером пор 0.45 мкм.

Раствор сравнения.
5.0 мг СО пиностробина и 0.05 мг СО
тектохризина растворяют
в 10 мл ацетонитрила при нагревании на водяной
бане, охлаждают до комнатной температуры и доводят тем же растворителем
до объема 25.0 мл. Фильтруют через мембранный фильтр с размером пор
0.45 мкм.

Хроматографирование проводят на жидкостном хроматографе с У
Ф
-
детектором в следующих условиях:


62



колонка размером 4.6 x 150 мм, заполненная силикагелем
октадецилсилильным для хроматографии с размером частиц 5 мкм
(например, Zorbax SB
-
C18⤀;



подвижная фаза
ацетонитрил Р



вода Р
-

кислота уксусная Р


50:49:1
);



скорость подвижной фазы 1,0 мл/мин;



температура колонки комнатная;



детектирование при длине волны 289 нм.

Время хроматографирования 30 мин.

Хроматографируют 20 мкл раствора сравнения.

Время удерживания пиностробина 28,19 мин. Относительное время
удерживания пика примеси тектохризина в стандартном образце около 30,80
мин.

Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются
следующие условия:



коэффициент разделения пиков примеси тектохризина и
пиностробина составляет не менее 1.15;



эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по пику
пиностробина составляет не менее 3700 теоретических тарелок;



относительное стандартное отклонение, рассчитанное по площади
пика пиностробина составляет не более 2 %;



коэффициент симметрии

пика пиностробина составляет не более 2.

Хроматографируют 20 мкл испытуемого раствора.

Содержание суммы примесей (Х) в стандартном образце, в процентах,
рассчитывают по формуле:


где:
S
i




сумма площадей пиков всех примесей на хроматограмме
и
спытуемого раствора;


63

S
0


площадь пика пиностробина на хроматограмме испытуемого
раствора.

Не учитывают пики растворителей.

Сумма примесей не должна превышать 1.0 %.

Этилацетат.

Не более

0.5 % (м/м).

Определение проводят методом
газовой хроматографии (
2.2.28
).

Раствор внутреннего стандарта.

0.5 мл
углерода тетрахлорида

Р

доводят

этанолом Р
до объема 100.0 мл.

Испытуемый раствор.
Около 150 мг (точная навеска) стандартного
образца
пиностробина

растворяют в 3 мл раствора внутреннего стандарта.

Раствор ср
авнения.

По 0.5 мл
этилацетата Р

и
углерода
тетрахлорида

Р

помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят
этанолом Р
до объема 100.0 мл и перемешивают.

Растворы используют свежеприготовленными.

Хроматографирование проводят на

газовом хроматографе с п
ламенно
-
ионизационным детектором в следующих условиях:



колонка капиллярная, размером 30 м х 0.25 мм, покрытая пленкой
сополимера фенил
-
диметилполисилоксана (
5:95
) толщиной 0.25 мм;



газ
-
носитель
аргон для хроматографии Р
, скорость 20 мл /мин;



ск
орость водорода 40 мл /мин;



скорость воздуха 400 мл /мин;



температура колонки 30 ºС;



температура детектора 120 ºС;



температура испарителя 100 ºС.

Хроматографируют 0,2 мкл раствора сравнения.

Хроматографическая система считается пригодной, есл
и выполняются
следующие условия:




эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по пику
этилацетата составляет не менее 30000 теоретических тарелок;



коэффициент симметрии пика

этилацетата

составляет

не более 2 %;


64



относительное стандартное от
клонение, рассчитанное для площади
пика этилацетата составляет не более 2 %.

Хроматографируют 0,2 мкл испытуемого раствора.

Содержание
этилацетата

в стандартном образце в процентах
рассчитывают по формуле:


где:

S
1



площадь пика
этилацетата

на хроматогр
амме испытуемого
раствора;

S
1
n



площадь пика внутреннего стандарта (
углерода тетрахлорида
) на
хроматограмме испытуемого раствора;

S
on



площадь пиков внутреннего стандарта (
углерода тетрахлорида
⤀,
на


хроматограмме раствора сравнения;


S
0



площадь пика
этилацетата

на хроматограмме раствора сравнения;

m



масса навески стандартного образца в миллиграммах;

V
0



объем растворителя в растворе сравнения в миллилитрах;


p



плотность
этилацетата
;

Р



содержание
этилацетата

в образце
этилацетата

в процентах;

3


разведение;




фактор пересчета, равный


Содержание С
4
Н
8
О
2


этилацетата
) в стандартном образце
пиностробина

должно быть не более 0,5 %.

Количественное определение.

Содержание пиностробина

в
стандартном образце
пиностробина

(Х), в процентах, рассчиты
вают по
формуле:


Х  100 %
-

Х
1



Х
2



Х
3
;

где: Х
1



содержание суммы примесей в процентах;

Х
2


содержание воды в процентах;


65

Х
3



содержание этанола в процентах.

Вода


2.5.12
).

Не более 0.5 %. Определение проводят из 0.150 г
стандартного образца пин
остробина.

Микробиологическая чистота:

определение микробиологической
чистоты исследуемых образцов субстанции пиностробина проведено в
соответствии с требованиями ГФ
XI
, вып.2, с.193, изменение № 3, категория
1. 2 Б. Субстанция в условиях испытания не обла
дает антимикробным
действием. В 1 г субстанции допускается наличие не более 1000 бактерий и
100 дрожжевых и плесневых грибов (суммарно). Не допускается наличие
Pseudomonas

aeruginosa

и
Staphylococcus

aureus
.

Наличие бактерий, дрожжевых и плесневых грибов в

субстанции
пиностробина не установлено.

Хранение.

В защищенном от света месте при температуре не выше 25
°С.

Для введения пиностробина в Государственную фармакопею в
качестве
стандартного образца предназначенного для идентификации и
количественного опреде
ления в лекарственном растительном сырье и
лекарственных растительных препаратах сформировано досье и
представлено в

РГП на ПХФ «Национальный центр экспертизы
лекарственных средств, изделий медицинского назначения и медицинской
техники», в которое включены

следующие разделы:

1
Спецификация качества стандартного образца пиностробина;

2 Валидация методики определения родственных примесей;

3 Сведения о лекарственном растительном сырье
почек тополя
бальзамического;

4 Валидация методики количественного определ
ения пиностробина в
почках тополя бальзамического
;

5 Технологическая схема получения пиностробина;

6 Производственная формула;

7 Валидация технологического процесса получения пиностробина;


66

8 Установление строения пиностробина;

9 Проект АНД. Пиностробин


с
тандартный образец.

Таким образом, разработан проект АНД на пиностробин


стандартный образец. Пиностробин
включен в Государственную
Ф
армакопею Республики Казахстан в качестве национального стандартного
образца ГФ РК, который
предназначен для идентификации

и
количественного определения в лекарственном растительном сырье и
лекарственных растительных препаратах
.


3.
6

Разработка опытно
-
промышленного регламента получения
субстанции пиностробина


Разработан и утвержден лабораторный регламент получения
субстанци
и пиностробина и на его основе разработан
опытно
-
промышленный регламент
.

В опытно
-
промышленный регламент входят следующие разделы:

1)
Характеристика конечной продукции производства

2)
Технологическая схема производства

3)
Аппаратурная схема производства и
спецификация оборудования

4)
Характеристика сырья, материалов и полуфабрикатов

5)
Изложение технологического процесса

6)
Материальный баланс

7)
Переработка и обезвреживание отходов производства

8)

Контроль производства и управление технологическим процессо
м

9) Техника безопасности, пожарная безопасность и производственная
санитария


Основные стадии технологической схемы получения пиностробина из
экстракта почек тополя бальзамического с применением центробежной
хроматографии распределения на рисунке
3.
6
.
1.


67

Т
ехнологическ
ая

схем
а

получения пиностробина


























Рис.
3.
6
.1.

Основные стадии технологического процесса производства
субстанции пиностробина


Изложение технологического процесса

производства субстанции

ВР.1
-

Подготовка пробы, растворит
елей

Подготовка
пробы
,
растворителей


ВР.1


Подготовка
растворителей


ВР.1
.1


Подготовка п
робы


ВР.1
.2


Включение установки
FCPC
-
5000, стабилизация
системы

ВР.1.3


Выделение технического
пиностробина на препаративной
установке
FCPC
-
5000


ТП 1


Ввод пробы


ТП

1.1


Разделение экстракта на
фракции


ТП 1.2


Упаривание фракций

ТП 2


Упа
ривание фракции,
обогащенной

пиностробином

ТП 2.1


Упаривание фракций, не
содержащих

пиностробин

ТП 2.2


Упаривание сливов

ТП 2.3


Рекуперация
растворителей

ТП
2.4


Подготовка,

пиностробина
,
растворителей


ВР.
2


Подготовка
растворителей


ВР.2
.1


Определение массы
пиностробина


ВР.2.2


Очистка пиностробина

ТП 3


Перекристаллизация
пиностробина

ТП 3.1


Упаковка, маркировка,
отгрузка

УМО


Фасовка

УМО


Упаковка, маркировка

УМО


На склад


68

ВР 1.1 Подготовка растворителей

Для подготовки стационарной фазы (СФ) и подвижной фазы (ПФ) для
хроматографического разделения на установке
FCPC
-
5000 отмеряют мерным
цилиндром 5,4 кг гексана, 6,0 кг этанола и 5,4 кг этилацетата, 6,0 кг
дистиллированно
й воды смешивают в делительной воронке подходящего
объема, тщательно встряхивают в течение 5
-
10 мин и оставляют на 40 мин
расслаиваться. Далее сливают нижний слой (подвижная фаза) 13,2 кг и
верхний слой (стационарная фаза) 9,6 кг, передают на ТП.1.

ВР 1.2
Подготовка пробы

Взвешивают на весах общего назначения марки МЕ
-
2100 (Германия,
предел измерения 2,1 кг, цена деления 0,01 г) 50,0 г (точная навеска)
экстракта почек тополя бальзамического, затем количественно переносят в
химический стакан объемом 1,0 л и

растворяют в 800 мл смеси стационарной
и подвижной фаз и передают на ТП 1.

ВР 1.3 Включение установки
FCPC
-
5000 и стабилизация системы

Включают термостат ротора
FCPC
-
5000, насос, детектор,
фракционный коллектор, коммуникатор и компьютер установки
FCPC
-
5
000.
Открывают программу
ReSponder

и активируют метод для промывки
системы. Вентиль направления потока переключают в положение промывки,
т.е. минуя ротор установки, и поочередно прокачивают коммуникации
стационарной фазой, подвижной фазой и пробой соответс
твенно для
удаления воздуха в течение 5 минут со скоростью 100 мл/мин. По окончании
заполнения коммуникаций вентиль направления потока переключают в
рабочее положение.

Стационарная фаза закачивается в ротор при помощи насоса
установки со скоростью 100 м
л/мин при скорости вращения ротора 500
оборотов в минуту. Время заполнения/промывки ротора 50 минут.

Стабилизация системы установки
FCPC
-
5000 проводится при подаче
подвижной фазы в ротор с помощью насоса со скоростью 100 мл/мин, при
скорости вращения рот
ора 1000 оборотов в минуту. Время стабилизации

69

системы 10
-
15 минут. После чего установка
FCPC
-
5000 готова для
хроматографического разделения (ТП.1).

ВР.2
-

Подготовка пиностробина, растворителя

ВР 2.1 Определение объема растворителя

Отмеряют мерным цилинд
ром 0,4 л гексана и передают на ТП 3.1

ВР 2.2 Определение массы технического пиностробина

Взвешивают на весах общего назначения 30,0 г (точная навеска)
пиностробина технического и передают на ТП 3.1.

ТП.1
-

Выделение технического пиностробина на препарати
вной
установке
FCPC

Активируют метод хроматографического разделения, который
включает в себя: 1) эквилибровку (6 минут со скоростью подачи мобильной
фазы 10 мл/мин, запуск вращения ротора до скорости 1000 оборотов в
минуту), 2) ввод пробы (8 минут со ско
ростью 100 мл/мин) и 3) разделение
пробы на фракции (50 минут со скоростью подачи мобильной фазы 50
мл/мин, скорость вращения ротора 1000 оборотов в минуту), 4) экструзия


смена местами подвижной и стационарной фаз (40 минут со скоростью
подачи подвижной
фазы 100 мл/мин).

ТП 1.1 Ввод пробы

Проба закачивается в ротор при помощи насоса установки
FCPC

со
скоростью 100 мл/мин в течение 8 минут. Объем вводимой пробы 800 мл.

ТП 1.2 Разделение пробы на фракции

Разделение проводится при скорости подачи мобильной ф
азы 50
мл/мин и скорости вращения ротора 1000 оборотов/мин, полное разделение
вводимой пробы происходит в течение 90 минут. УФ
-
детектирование при
289 нм.

Отбор фракций проводится при помощи фракционного коллектора,
переключением вентилей направления потока
, согласно получаемой
хроматограмме: при появлении первого пика (через 15
-
20 мин) собирают
первую фракцию в течение 15 минут, затем собирают вторую фракцию в

70

течение 20 минут, при выходе пика пиностробина собирают третью фракцию
в течение 5 минут, затем со
бирают четвертую фракцию до окончания выхода
пробы (показание детектора 0
-
2
AU
). Таким образом, в результате разделения
получают 4 фракции объемом от 250 до 1000 мл.

По окончании разделения скорость подачи мобильной фазы снижаем
до 10 мл/мин и выключаем р
отор, после его полной остановки отключаем
насос.

В день проводят 5 разделений.

Фракции, обогащенные пиностробином, передаются на ТП 2.1.

Фракции, несодержащие пиностробина, передаются на ТП 2.2.

Общие затраты времени на проведение данной стадии (ТП.1), а

именно, н
а разделение 9,0 кг экстракта почек тополя бальзамического с
применением установки
FCPC
,
составляют 36 рабочих дней.


ТП.2


Упаривание фракций

ТП 2.1 Упаривание фракций, обогащенных пиностробином

Фракции, обогащенные пиностробином (фракции № 3)
, упариваются
на ротационном испарителе
RV

05
basic

или аналогичном. После отгона
растворителя получаем кристаллический остаток (пиностробин технический)
массой 1,44 кг, который передается на перекристаллизацию (ТП.4).

ТП 2.2 Упаривание фракций, не содержа
щих пиностробин

Фракции, не содержащие пиностробина, упариваются на ротационном
испарителе
Pilotvap

или аналогичном. Отдельно собирают остатки фракции
№ 1, фракции № 2, фракции № 4 и передают для анализа на наличие
пиностробина.

Качественный анализ фракций

проводят методом обращенно
-
фазовой
ВЭЖХ высокого давления на приборе

Packard

Agilent

1100
Series

в
изократическом режиме в следующих условиях:

-

аналитическая колонка, заполненная сорбентом
Zorbax

CB
-
C
18
4,6 х
150 мм, с размером частиц 5 мкм;

-

с
остав подвижной фазы:

ацетонитрил


вода
-

уксусная кислота
в
соотношении
50
:
49:1
;


71

-

детектирование при длине волны 289 нм;

-

температура колонки


20
о
С;

-

скорость подвижной фазы 1,0 мл/мин;

-

объем вводимой пробы 20 мкл.

Обсчет данных производили за сч
ет программного обеспечения
ChemStation
.

ТП 2.3 Упаривание сливов

Сливы стационарной и мобильной фазы упаривают на ротационном
испарителе
Pilotvap

или аналогичном. Остаток передают для анализа на
наличие пиностробина. Полученные отгоны стационарной и мобил
ьной фазы
передают на ТП 2.4.

Качественный анализ сухого остатка

проводят методом обращенно
-
фазовой ВЭЖХ высокого давления на приборе
Hewlett

Packard

Agilent

1100
Series

в изократическом режиме в следующих условиях:

-

аналитическая колонка, заполненная сор
бентом
Zorbax

CB
-
C
18
4,6 х
150 мм, с размером частиц 5 мкм;

-

состав подвижной фазы:

ацетонитрил


вода
-

уксусная кислота
в
соотношении 50
:49:1
;

-

детектирование при длине волны 289 нм;

-

температура колонки


20
о
С;

-

скорость подвижной фазы 1,0 мл/мин;


-

объем вводимой пробы 20 мкл.

Обсчет данных производили за счет программного обеспечения
ChemStation
.

ТП 2.4 Рекуперация растворителей

Полученные отгоны стационарной и мобильной фазы заливают в
делительную воронку объемом 25 л, тщательно встряхивают в т
ечение 5
минут и отстаивают в течение 1 часа. Далее стационарную и мобильную
фазы разделяют и передают на ТП.1.

Общие затраты времени на проведение данной стадии (ТП.2), а
именно, н
а сгущение фракций и рекуперацию растворителей после

72

разделения 9,0 кг экст
ракта почек тополя бальзамического с применением
препаративной установки
FCPC
,
составляет 36 рабочих дней.


ТП. 3
Очистка продуктов

ТП 3.1 Растворение, кристаллизация.

Сушка очищенного
пиностробина

Пиностробин технический, полученный на стадии ТП 2.1, под
вергают
перекристаллизации. Испарительную колбу со 30 г пиностробина
технического устанавливают на водяную баню при температуре 50
-
60
0
С и
растворяют в 400 мл гексана. Гексан добавляют постепенно до момента
полного растворения пиностробина. Чтобы снизить
потери, используют
обратный холодильник.

После полного растворения пиностробина колбу снимают с водяной
бани и постепенно охлаждают (сначала при комнатной температуре 1 час,
затем в холодильнике при 2
-
5
0
С


1 час). При этом в колбе постепенно
начинают вы
падать кристаллы пиностробина игольчатой формы.

Пиностробин сушат сначала на фильтре под вытяжной вентиляцией в
течение 2 часов, а затем переносят в фарфоровую чашку и сушат их в
вакуумном сушильном шкафу при температуре 40
0
С и давлении

0,08
-

-
0,09⤀
мРа
до постоянной массы. Пиностробин должен иметь вид игловидных
кристаллов белого цвета без запаха.

Температуру плавления определяют в открытом капилляре на приборе
для определения температуры плавления (ПТП).

Качественный анализ субстанции пиностробина

пров
одят методом
обращенно
-
фазовой ВЭЖХ высокого давления на приборе
Hewlett

Packard

Agilent

1100
Series

в изократическом режиме в следующих условиях:

-

аналитическая колонка, заполненная сорбентом
Zorbax

CB
-
C
18
4,6 х
150 мм, с размером частиц 5 мкм;

-

состав

подвижной фазы:
ацетонитрил


вода
-

уксусная кислота

в
соотношении
50
:
49:1
;

-

детектирование при длине волны 289 нм;

-

температура колонки


20
о
С;

-

скорость подвижной фазы 1,0 мл/мин;


73

-

объем вводимой пробы 20 мкл.

Обсчет данных производили за счет пр
ограммного обеспечения
ChemStation
.

Время удерживания пиностробина: 29,4
±1
,0 мин.

Общие затраты времени на проведение данной стадии (ТП.3.1), а
именно, н
а получение 1,0 кг субстанции пиностробина с чистотой не менее
99,0 %
составляют 36 рабочих дней.


Стад
ии упаковки, маркировки, отгрузки

УМО.1
-

Упаковка и маркировка пиностробина

УМО 1.1 Фасовка в банки

По 0.1 кг или 0.2 кг в банки из стекломассы типа БВ
-
1000
-
63
-
ОС или
БВ
-
2000
-
90
-
ОС по ОСТ 64
-
2
-
71
-
80. Банки укупоривают навинчиваемыми
пластмассовыми крышкам
и типа 1.1 с прокладками типа 2.1 по ОСТ 64
-
2
-
87
-
81 или ТУ 64
-
2
-
269
-
78. Крышку и часть горловины обтягивают пергаментом
по ГОСТ 1341
-
97, обвязывают нитками хлопчатобумажными по ГОСТ 6309
-
93 и заливают парафином по ГОСТ 23683
-
89. На банку наклеивают этикетк
у
из бумаги этикеточной по ГОСТ 7625
-
86. Каждую банку заворачивают в
бумагу оберточную по ГОСТ 7625
-
86.


УМО 1.2 Маркировка

На этикетки указывают страну, предприятие
-
изготовитель, его
товарный знак и адрес, название препарата на государственном, латинском
и
русском языках, массу препарата, условия хранения, регистрационный
номер, номер серии, срок годности. Маркировка групповой упаковки и
транспортной тары по ГОСТ 14192
-
96.

Затем препарат передают на склад.

Аппаратурная

схема производства субстанции пиностр
обина
представлена на рисунке 3.6
.
2.





Растворение

Хроматографическое
разделение

Перекристаллизация
продукта

Сбор
фракций

Возврат элюента
в систему

СО
2
-
газ

СО
2
-
экстракт


Сливы

Сушка
продукта


Упаковка,
маркировка,
отгрузка

1

2

3

4

5

6

7

Рисунок 3.6
.
2.

Аппаратурная

схема про
изводст
ва субстанции пиностробина

74

Заключение по 3
г
лаве

Впервые
для в
ыделения
и очистки флавоноида пиностробина

из СО
2
-
экстракта
почек тополя бальзамического

и
спользована центробежн
ая
хроматография распределения.

В результате проведенных экспериментальных работ определены
оптимальные параметры
режима
экстракции

почек тополя

бальзамического с
использованием
СО
2
-
газа в

сверхкритическом состоянии: давление 20 МПа,
температура
60°С, продолжительность экстракции 180 минут.
П
олнота
извлечения пиностробина в данном режиме составила 91,0 %, выход СО
2
-
экстракта


16,6 % (33,2 г) с со
держанием пиностробина


25,1 % (8,33 г) по
данным ВЭЖХ. Остаточное содержание пиностробина в шроте
-

0,41 % (0,81
г)

Оптимальной системой растворителей для выделения пиностробина
из СО
2
-
экстракта
почек тополя бальзамического

определена смесь
гексан:этилац
етат
:ацетонитрил:вода (6:4:5:4), в качестве подвижной фазы
использован нижний слой системы.

На основании проведенных исследований, впервые разработана
технология получения субстанции пиностробина с применением
центробежной хроматографии распределения, опре
делены параметры,
обеспечивающие количественный выход качественного целевого продукта.
Разработан и утвержден

лабораторный
(Приложение
А
)
и

опытно
-
промышленный регламент
на производство субстанции
пиностробина

пиностробина (Приложение
Б
).

Пиностробин включ
ен в качестве стандартного образца в
Государственную Фармакопею Республики Казахстан (ГФ РК, Т.
III
., 2014,
С. 123
-
126)
(Приложение В)
.







76

ГЛАВА

4

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ
ПОЛУЧЕНИЯ
СУБСТАНЦИИ ОКСИМА ПИНОСТРОБИНА



4.1
.

Подбор оптимальных условий оксимирова
ния пиностробина


Как известно, при помощи химической модификации можно получить
биологичеки активные вещества или повысить активность исходного
соединения. Поэтому на основе пиностробина проведен ряд химических
превращений, для получения новых биологическ
и активных веществ на его
основе
[
115
-
120
].

Взаимодействием пиностробина (40) с гидроксиламином

солянокислым

в этиловом спирте с добавлением натрия гидрокарбоната
получили оксим пиностробина (41)

(рис.
4.1.1
.)
, который обладает
выраженным гепатопротекторн
ым действием, преобладающим над
аналогичной активностью пиностробина и суммы экстрактивных веществ
почек тополя бальзамического [12
1
].



(40)



(41⤀

Рис.
4.1.1
. Химическая схема производства субстанции оксима
пиностробина.

Произведен подбор оптимальных условий для проведения синт
еза
оксима пиностробина, который

обеспечат количественный выход целевого
продукта. В ходе экспериментов

реакцию оксимир
ования проводили на 30 г

пиностробина при 60
°С, при этом
варьировали
объемом этанола,
количеством гидроксиламина солянокислого
, а также изменяли время

77

синтеза. Зависимость количественного выхода оксима пиностробина от
условий проведения
реакций представлен
а в таблице 4.1.1
.


Таблица 4.1.1



Зависимость выхода оксима пиностробина от условий
синтеза при
температуре
60
о
С (количество пиностробина



30 г)


Объем
этанола, мл

Гидроксиламин
солянокислый, г

Натрия гидро
-
карбонат, г

Продолжитель
-
ность синтеза, ч

Вы
ход оксима
пиностробина,

г


%


500

11,55

15,01

24

17,9 (
56


500

11,55

15,00

48

23,0 (
72


300

15,01

15,02

24

26,6 (
83


250

15,00

15,01

72

31,4 (98)


Как видно из результатов таблицы
4.1.1
, основными факторами,
влияющими на количественн
ый выход оксима п
иностр
обина
, являются
объем
этанола,
избыточное количество реагента гидроксиламина солянокислого и
п
родолжительность реакции
.

Взаимодействием 30 г пиностробина (40) с
15 г
гидроксиламина солянокислого

в
250 мл этилового спирта

с добавлением
15 г
натрия гид
рокарбоната
в течение 72 часов
, при 60 °С,

получили
31,4 г
оксим
а

пиностробина (41)
. Выход оксима пиностробина

составил 98 %, с чистотой
не менее 99 % по данным ВЭЖХ.

Ранее оксим пиностробина согласно утвержденной методики
получали взаимодействием пиностр
обина с солянокислым гидроксиламином
в среде этилового

спирта в течение 24 часов при температуре 60
0
С. Данный
метод позволял получить оксим пиностробина с сравнительно низким
выходом (56%), кроме того при обработке реакционной смеси
использовалась соляная
кислота, что привело к сильному загрязнению
конечного продукта, и затруднениям в последующей очистке, а также его
потерям.
Также п
роведенные эксперименты показали, что применение
методики обработки реакционной смеси соляной кислотой с последующим
экстракци
онным извлечением конечного продукта этилацетатом приводит к

78

его сильному загрязнению, и затруднениям в последующей очистке, а также
потерям оксима пиностробина. Поэтому
разработана
эффективная,
экономичная, экологически безопасная технология производства
субстанции
оксима пиностробина, позволяющая увеличить выход целевого продукта в 1,75
раза (с 56% до 98%) с чистотой не менее 99%, при этом исключена стадия
обработки реакционной смеси соляной кислотой и достигнуто повышение
производительности труда.

Таким
образом, нами подобраны
оптимальные
условия
оксимирования пиностробина, обеспечивающ
ие выход оксима пиностробина
98
%, с чистотой не менее 99 %.


4.2
.

Оценка качества субстанци
и

оксима пиностробина


На основании результатов анализов 3 серий разработан проек
т АНД на
субстанцию оксима пиностробина, который составлен в соответствии с
требованиями ГФ РК

(Приложение Г)
.

Спецификация качества включает в себя следующие показатели:



С
16
Н
15
N
О
4



M
r


285,0


Свойства:

Описание:

Кристалли
ческий порошок от белого до белого с
желтоватым оттенком цвета, без запаха.

Температура плавления
: От 182 ºС до 184

С (ГФ РК
I
, т. 1).

Растворимость
:
Растворим 95% спирте, этилацетате, ацетоне,
практически не растворим в
воде. (ГФ

РК
I
, т. 1,
1.4
).

Идент
ификация
:

А. Инфракрасный спектр поглощения субстанции, полученный в
дисках с калия бромидом (3 мг препарата в 300 мг калия бромида), в области

79

от 3800 до 600 см
-
1
, должен иметь характеристические полосы поглощения
при 3436 (N
-
ОН), 3007, 2983, 2916, 2848
, 1646, 1616, 1577, 1442, 1351, 1338,
1295, 1226, 1191, 1153, 1093, 1029, 886, 704, 651, 640, 539, 464.

Б. Ультрафиолетовый спектр 0,001 % раствора субстанции в этиловом
спирте 96 % в области от 190 нм до 400 нм должен иметь максимумы
поглощения при длинах

волн 280±2 нм.

В. 0.02 г субстанции растворяют в 5 мл
70 % спирта Р

и фильтруют
через бумажный фильтр. К 2 мл полученного раствора прибавляют 5
-
7
капель
кислоты хлороводородной Р,
0.01
-
0.02 г

магния Р

(порошок или
стружка) и нагревают на водяной бане в т
ечение 5 мин; постепенно
появляется красное окрашивание (флавоноиды).

Испытания
:

Потеря в массе при высушивании.

Не более 5.0 %

(ГФ РК
I
, т. 1,
2.2.32.).
0.500 г субстанции сушат при температуре (102.5 ± 2.5)ºС до
постоянной массы.

Тяжелые металлы
:

Не бо
лее 0.01 % в субстанции (ГФ РК, т. 2).

Посторонние примеси
: По

20 мкл испытуемого раствора,
приготовленного для количественного определения, хроматографируют на
жидкостном хроматографе с УФ
-
детектором в условиях, описанных в
разделе «Количественное определ
ение» (ГФ РК
I
. т.1,
2.2.29
).

На хроматограмме испытуемого раствора сумма площадей всех
дополнительных пиков, кроме основного не должна превышать 2.0%.

Микробиологическая чистота
:

Испытание проводят в соответствии с
требованиями

ГФ РК
I
, т. 1,
2.6.12
и ГФ
РК, т. 2,
2.6.13.

Субстанция в условиях испытания не обладает антимикробным
действием.

Субстанция должна соответствовать требованиям

ГФ РК
I
, т. 1,
5.1.4.
категория
3В.

В 1 г
субстанции

допускается наличие не более 10000 аэробных
бактерий, 100


дрожжевых
и плесневых грибов (суммарно), 100

80

энтеробактерий и некоторых других грамотрицательных бактерий.

В 10 г
субстанции

не допускается наличие
Salmonella
, в 1 г
субстанции
-

Escherichia

coli
,
Pseudomonas

aeruginosa

и
Staphylococcus

aureus
.

Остаточные количества

органических растворителей (этилацетат).

Определение проводят методом газовой хроматографии (ГФ РК
I
, т. 1,
2.2.28
).

Испытуемый раствор
: 150.0 мг субстанции растворяют в 3 мл
раствора внутреннего стандарта.

Раствор сравнения:

По 0.5 мл
этилацетата Р
и
уг
лерода
тетрахлорида Р

помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят
объем раствора
96 % спирте этиловом Р

до метки и перемешивают.

Раствор внутреннего стандарта:
0.5 мл
углерода тетрахлорида Р

помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят об
ъем раствора
96% спирте этиловом Р

до метки и перемешивают.

По 0.2 мкл испытуемого раствора и раствора сравнения
хроматографируют на газовом хроматографе с пламенно
-
ионизационным
детектором, получая не менее 5 хроматограмм для каждого из растворов, в
следу
ющих условиях:



колонка капиллярная, размером 30 м х 0.25 мм, покрытая пленкой
сополимера фенил
-

диметилполисилоксана (5:95) толщиной 0.25 мм;



газ
-
носитель:
аргон для хроматографии Р
, скорость 20 мл /мин;



скорость водорода 40 мл /мин;



скорость во
здуха 400 мл /мин;



температура колонки 30ºС;



температура детектора 120 ºС;



температура испарителя 100 ºС.

Содержание этилацетата (Х) в субстанции в процентах рассчитывают
по формуле:


81





где:

S
1



площадь пика этилацетата на хроматограмме испытуемого
раствора;

S
1
n



площадь пика внутреннего стандарта (углерода тетрахлорида) на
хроматограмме испытуемого раствора;

S
on



площадь пиков внутреннего стандарта (углерода тетрахл
орида),
на


хроматограмме раствора сравнения;

S
0



площадь пика этилацетата на хроматограмме раствора сравнения;

m



масса навески субстанции в миллиграммах;

V
0



объем растворителя в растворе сравнения в миллилитрах;

p



плотность этилацетата;

Р



содерж
ание этилацетата в образце этилацетата в процентах;

3


разведение;




фактор пересчета, равный


,

Содержание С
4
Н
8
О
2

(этилацетата) в субстации пиностробина должно
быть не более 0,
5 %.

Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются
следующие условия:

-

эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по пику
этилацетата на хроматограмме раствора сравнения, должно быть не менее
30000 теоретических тарелок;

-
коэффициент симметрии пика, рассчитанный по пику этилацетата на
хроматограмме
раствора сравнения,

должен быть не более 2 %;

-

относительное стандартное отклонение, рассчитанное для площади
пика
этилацетата

на хроматограмме

раствора сравнения,
должно быть

не
более 2 %.


82

Количественное определение
. Определение проводят методом
жидкостной хроматографии
-

ВЭЖХ (ГФ РК
I
, т. 1,
2.2.29
).

Испытуемый раствор:

Около 5 мг (точная навеска) оксима
пиностробина помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют
10 м
л ацетонитрила, перемешивают до полного растворения, доводят объем
раствора до метки и перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр с
размером пор 0,45 мкм.

Раствор сравнения:

1.0 мг РСО оксима пиностробина помещают в
мерную колбу вместимостью 25 мл, ра
створяют в 10 мл подвижной фазы,
доводят объем раствора подвижной фазой до метки и перемешивают.

По 20 мкл испытуемого раствора и раствора сравнения попеременно
хроматографируют на жидкостном хроматографе с УФ
-
детектором, получая
не менее 5 хроматограмм д
ля каждого из растворов, в следующих условиях
:

-

колонка размером 4,6
x

150 мм, заполненная «
Zorbax

CB
-
C
18
» с
размером частиц 5 мкм;

-

подвижная фаза: ацетонитрил
-

кислота уксусная (50:
50
⤀,
дегазированная любым удобным способом;

-

скорость подвижной фаз
ы
-

1,0 мл/мин;

-

детектирование при длине волны 289 нм;

-

температура колонки
-

20˚ С;


Содержание оксима пиностробина в процентах (
X
), вычисляют по
формуле:





где
S
1

среднее значение площадей пика
оксима пиностробина,
вычисленное из хроматограмм испытуемого раствора;

S
0


среднее значение суммы площадей всех пиков, кроме пиков
растворителя, вычисленное из испытуемого раствора;

m
1



масса навески субстанции, в миллиграммах;

m
0



масса навески РСО ок
сима пиностробина, в миллиграммах;


83

Р


содержание оксима пиностробина в СО оксима пиностробина, в
процентах;

Содержание оксима пиностробина должно быть не менее 97,0 %.

Результаты анализа считаются достоверными, если выполняются
требования теста «Проверк
а пригодности хроматографической системы».

Хроматографическая система считается пригодной, если
выполняются следующие условия:

-

эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по
пику оксима пиностробина на хроматограммах раствора сравнения, до
лжна
быть не менее 2000 теоретических тарелок;

-

относительно стандартное отклонение, рассчитанное для площади
пика оксима пиностробина на хроматограммах раствора сравнения, должна
быть не более 2.0 %.

Хранение
: В сухом, защищенном от света месте, при те
мпературе не
выше 30 °С.

Срок годности
:

2 года.

Результаты исследования показателей качества субстанции оксима
пиностробина представлены
в табл.
4.2.1
.


Т
аблица
4.2.1



Показатели качества субстанции оксима пиностробина


Наименование
показателей

По проекту

АНД

Результаты

011115

021115

031115

1

2

3

4

5

Описание

Кристаллический порошок от белого
до белого с желтоватым оттенком
цвета, без запаха

Соответ
-
ствует

Соответ
-
ствует

Соответ
-
ствует

Подлинность











В области от 4000 см
-
1

до 500 см
-
1

должен и
меть полосы поглощения
при 3436 (
N
-
ОН), 3007, 2983, 2916,
2848, 1646, 1616, 1577, 1442, 1351,
1338, 1295, 1226, 1191, 1153, 1093,
1029, 886, 704, 651, 640, 539, 464
.

В области от 190 нм до 400 нм
должен иметь максимумы
поглощения

поглощения при
длинах вол
н 280±2 нм.

Соответ
-
ствует

Соответ
-
ствует

Соответ
-
ствует


84

1

2

3

4

5

Растворимость

Растворим 95 % спирте,
этилацетате, ацетоне,
практически
не растворим в
воде

Соответ
-
ствует

Соответ
-
ствует

Соответ
-
ствует

Качественная
реакция на
флавоноиды

Должно проявит
ься красное
окрашивание

Соответ
-
ствует

Соответ
-
ствует

Соответ
-
ствует

Температура
плавления,

С

От 182ºС до 184

181
-
183

182
-
183

181
-
183

Количественное
определение, %

Не менее 97,0

99,10

99,20

99,40

Посторонние
примеси, %

Не более 3,0

1,55

1,24

1,18

По
теря в массе
при
высушивании, %

Не более 0,5

0,38

0,34

0,43

Микробиологи
-
ческая чистота

Общее число грибов не более 100

Соответ
-
ствует

Соответ
-
ствует

Соответ
-
ствует


Разработана методика количественного определения содержания
оксима пиностробина в субст
анции пиностробина методом ВЭЖХ и доказана
ее валидность.
По результатам исследования разработана спецификация
качества субстанции оксима пиностробина.



4.3

Разработка
опытно
-
промышленного регламента получения

субстанции оксима пиностробина


На основании

полученных результатов разработана технология
получения субстанции оксима пиностробина которая включает в себя два
этапа: оксимирование пиностробина и перекристаллизацию готового
продукта


оксима пиностробина.


Т
ехнологическая
схема производства субстанц
ии

оксима

пиностробина
представлена на рисунке
4.3.1
.



85


Рис.
4.3.1
. Технологическая схема производства субстанции оксима
пиностробина


Изложение технологического процесса:

Стадии вспомогательных работ

ВР.1
-

Подготовка пиностроб
ина, растворителя и реагентов

ВР 1.1

Определение массы пиностробина

Подготовка п
иностробина,
растворителя и реагентов

ВР.1

Взвешивание
пиностробина


ВР 1.1

Определение объема
растворителя

ВР 1.2

Определение массы

гидроксиламина

солянокислого

ВР
1
.3

Определение массы

гидрокарбоната натрия

ВР 1.4

ТП

1
.1


Растворение пиностр
обина и
гидроксиламина

ТП.
1


Синтез оксима пиностробина


ТП

1
.
2


Добавление натрия
гидрокарбоната


Оксимирование

ТП

1
.
3


ТП

2.1


Обработка реакционной
смеси

ТП.
2

Получение оксима
пиностробина

ТП 2.2

Упаривание растворителя


ТП 3.1

ТП 3.2

У
МО

УМО

ТП
.

3

Перекристаллизация
оксима пиностробина


Сушка и взвешивание

Фасовка в банки


Маркировка


Кристаллизация оксима
пиностробина


УМО 1

Упаковка и маркировка
оксима пиностробина



86

Взвешивают на весах общего назначения марки МЕ
-
2100 (Германия,
предел измерения 2.1 кг, цена деления 0.01 г) 30,0 г (точная навеска)
пиностробина и передают на ТП 1.1.

ВР 1.2

Определение о
бъема растворителя

Отмеряют мерным цилиндром 0,
250

л спирта этилового и передают на
ТП 1.1.

ВР 1.3

Определение массы
гидроксиламина солянокислого


Взвешивают на весах общего назначения марки МЕ
-
2100 (Германия,
предел измерения 2.1 кг, цена деления 0.01 г)
15,0

г (точная навеска)

гидроксиламина солянокислого

и передают на ТП 1.1.

ВР 1.4

Определение массы гидрокарбоната натрия

Взвешивают на весах общего назначения марки МЕ
-
2100 (Германия,
предел измерения 2.1 кг, цена деления 0.01 г)
15,
0 г (точная навеска)

н
атрия
гидрокарбоната и передают на ТП 1.1.

ТП.
1

-

Синтез оксима пиностробина

ТП 1.1 Растворение пиностробина и
гидроксиламина солянокислого

30 г пиностробина и
15,0

г гидроксиламина солянокислого
растворяют при 50
-
60
о
С в 0,
250

л спирта этилового и передаю
т на ТП

1
.
3
.

ТП 1.2 Добавление натрия гидрокарбоната

К спиртовому раствору пиностробина и
гидроксиламина
солянокислого присыпают 15,0 г гидрокарбоната натрия. Реакционную смесь
передают на ТП
1
.3.

ТП 1.3 Оксимирование пиностробина

Реакционную смесь перемеш
ивают при 50
-
60
о
С в течение
7
2 часов.
Ход реакции контролируют с применением ТСХ. По завершении реакции
смесь передают на ТП 2.1.

ТП.
2

-

Получение оксима пиностробина

ТП 2.1 Обработка реакционной смеси


87

По окончании синтеза отделяли выпавший продукт декан
тацией,
трижды промывают этанолом, затем подвергают дальнейшей
перекристаллизации из этанола, а затем из этилацетата.

ТП
2
.
2

Упаривание растворителя

Этилацетатный раствор заливают в колбу роторного испарителя
IK
A

RV

05
basic
. В роторном испарителе проводит
ся упаривание растворителя и
получение технического оксима пиностробина. Процесс проводят при
температуре 60
0
С.
Т
ехнический оксим пиностробина поступает на ТП
3
.

ТП.
3

-

Кристаллизация оксима пиностробина

ТП
3
.1 Перекристаллизация оксима пиностробина

Оксим

пиностробина технический растворяют при нагревании до 50
-
60
о
С в спирте этиловом 96 %, оставляют постоять
1
2 часов в холодном месте
для кристаллизации. Затем растворитель отделяют от кристаллов
декантацией. Растворитель утилизируют, а оксим пиносробина
кр
исталлический передают на ТП
3
.2.

ТП
3
.2

Сушка и взвешивание
продукта

После кристаллизации оксим пиностробина сушат сначала на фильтре
под вытяжной вентиляцией в течение 2 часов, а затем переносят в
фарфоровую чашку и сушат его в вакуумном сушильном шкафу
при
температуре 40
0
С и давлении

0,08
-

-
0,09) мРа до постоянной массы. Оксим
пиностробина должен иметь вид кристаллического порошка белого с
желтоватым оттенком цвета, без запаха.

Температуру плавления определяют на п
риборе для определения
температуры пл
авления
, которая составляет 182
-
184
0
С (из этилацетата).

Чистота и подлинность полученного оксима пиностробина
очищенного определяется методом ВЭЖХ. Чистота оксима пиностробина
очищенного должна составлять не менее 98,0 %.

Стадии упаковки, маркировки, от
грузки:

УМО.1
-

Упаковка и маркировка субстанции оксима
пиностробина


88

УМО 1.1 Фасовка в банки

По 0.1 кг или 0.2 кг в банки из стекломассы типа БВ
-
1000
-
63
-
ОС или
БВ
-
2000
-
90
-
ОС по ОСТ 64
-
2
-
71
-
80. Банки укупоривают навинчиваемыми
пластмассовыми крышками типа 1
.1 с прокладками типа 2.1 по ОСТ 64
-
2
-
87
-
81 или ТУ 64
-
2
-
269
-
78. Крышку и часть горловины обтягивают пергаментом
по ГОСТ 1341
-
97, обвязывают нитками хлопчатобумажными по ГОСТ 6309
-
93 и заливают парафином по ГОСТ 23683
-
89. На банку наклеивают этикетку
из бум
аги этикеточной по ГОСТ 7625
-
86. Каждую банку заворачивают в
бумагу оберточную по ГОСТ 7625
-
86.

УМО 1.2 Маркировка

На этикетки указывают страну, предприятие
-
изготовитель, его
товарный знак и адрес, название препарата на государственном, латинском и
русском

языках, массу препарата, условия хранения, регистрационный
номер, номер серии, срок годности. Маркировка групповой упаковки и
транспортной тары по ГОСТ 14192
-
96.

Затем препарат передают на склад.

Заключение по 4 главе

Проведен
а

реакция

оксимирования на ос
нове молекулы пиностробина
.
О
сновными факторами, влияющими на количественный выход оксима
пиностробина, являются объем этанола, избыточное количество реагента
гидроксиламина солянокислого и продолжительность реакции.
Выход оксима
пиностробина составил 98 %
, с чистотой не менее 99 % по данным ВЭЖХ.

По результатам исследования разработана спецификация качества
субстанции оксима пиностробина.

Таким образом,
впервые
разработана технология получения
субстанции оксима пин
остробина, которая включает в себя два
этапа:
оксимирование пиностробина и перекристаллизацию готового продукта


оксима пиностробина. Разработан и утвержден опытно
-
промышленный
регламент на производство субстанции оксима пиностробина

ОПР
ФД650050337Р
-
04
-
16
)
(Приложение
Д

.



89

ГЛАВА

5

РАЗРАБОТКА

ТЕХНОЛОГИИ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ
КАПСУЛИРОВАННОЙ ФОРМЫ ОКСИМА
ПИНОСТРОБИНА



В отечественной и зарубежной практике при разработке
лекарственных препаратов определяющее значение имеет выбор
рациональной лекарственной формы. Оптимально подобранные
лекарственные
формы позволяют максимально использовать лечебное
действие препаратов при минимальных побочных эффектах. Лекарственная
форма является основной структурной единицей современной
фармакотерапии, и ей по праву отводится первостепенная роль.
Общеизвестно, что с
корость и продолжительность терапевтического
действия лекарственного препарата зависят не только от его химической и
физиологической активности,

а также от

степени дисперсности, природы
вспомогательных веществ, технологии изготовления, вида лекарственной
ф
ормы и пути введения лекарственного препарата.


5.1
.

Разработка состава и технологии капсулированной формы на
основе оксима пиностробина


В холдинге «Фитохимия» проводятся работы по разработке
лекарственных форм на основе оксима пиностробина [12
2
-
128].

Для

разработки технологии, позволяющей получить капсулы с
оксимом пиностробина, подобран состав трех моде
льных композиции
(табл.
5.1.1
). Использованы биологически индифферентные вспомогательные
вещества: наполнители
-

лактоза, магния карбонат основной, крахма
л,
позволяющие регулировать объемную плотность и придавать необходимую

90

сыпучесть; скользящий ингредиент кальция стеарат; связующее вещество
-

повидон, полоксамер для улучшения растворения труднорастворимых
субстанций, а в качестве солюбилизатора применили
натрия лаурилсульфат.


Таблица
5.1.1

-

Состав модельных смесей
с о
ксим
ом

пиностробина


Наименование ингредиентов

Количество ингредиентов модели

на 1 капсулу, г

1

2

3

Оксим пиностробина

0,0500

0,0500

0,0500

Лактоза

0,0510

0,1086

-

Магния карбонат осно
вной

-

-

0,1046

Крахмал

0,0410

-

0,0310

Поливинилпирролидон

0,0080

0,0170

-

Полоксамер
Kolliphor P188 micro

0
,0308

-

0
,0124

Натрия альгинат

-

0,0042

-

Кальция стеарат

0,0002

0,0002

0,0020

Натрия лаурилсульфат

0,020

0,020

-

Вода очищенная

-

q
.
s.

q
.
s.

Спирт этиловый

q
.
s.

q
.
s.

-

Итого

0,2000

0,2000

0,2000


Технология приготовления модельных смесей для капсул с
оксимом пиностробина по 50 мг:

Для улучшения технологических свойств и обеспечения однородности
дозирования капсул оксима пиностробина введена

стадия влажного
гранулирования, оптимизировано количество скользящих веществ.

Для приготовления гранул смешивали измельченные и просеянные
вспомогательные вещества и действующе
е вещество оксим пиностробина.
Смешивание
производили
в смесителе «V
-
образном»
марки
«V
-
20», куда
загружали сразу все компоненты,
процесс перемешивания составило

45
минут. Подготовленную смесь разместили во влажный гранулятор марки
HLSG
-
10
для получения влажных гранул.
Процесс увлажнения проводили с

91

применением связующего раствора пл
асдона с добавлением солюбил
изатора
натрия лаурилсульфата.
Полученные влажные массы пропустили через
сухой гранулятор для формирования гранул и поставили сушить в полочный
сушильный шкаф марки «СТС
-
0». Сушку влажных гранул проводили при
температуре (50±2)
0
С. Высушенные гранулы, просеивали через сито с
диаметром пор 1 мм, опудривали кальция стеаратом.

Определены технологические параметры гранул оксима
пиностробина: насыпная плотность, сыпучесть и потери массы при
высушивании. Насыпную плотность порошка изм
еряли на приборе модели
545 Р
-
АК
-
З. Сыпучесть гранулята устанавливали с использованием
виброустроиства марки ВП
-

12А. Результаты определения технологических
параметров гра
нул оксима пиностробина (табл. 5.1.2
).


Таблица
5.1
.
2

-

Технологические параметры г
ранул оксима пиностробина


№ модельной
смеси

Насыпная плотность,
г/мл

Сыпучесть, г/с

Потеря массы при
высушивании, %

1

0,595

3,026

1,8

2

0,643

3,690

2,2

3

0,402

0,759

1,0


Проведенные исследования показали, что оптимальными по
технологическим свойствам

являются гранулы оксима пиностробина модели
№1, обладающие хорошей насыпной плотностью и сыпучестью.

Затем проведен

процесс капсулирования на установке марки «JTJ
-
100A», используя желудочно
-

растворимые капсулы №2.

Для оценки качества капсул провели изу
чение ряда фармацевтических
параметров, по разработанной нами спецификации качества капсул оксима
пиностроб
ина. Фармацевтические параметры,
определяли в соот
ветствии с
требованиями ГФ РК.
По результатам анализа 3 серий опытных образцов
капсул оксима пин
ост
робина провели определение
показателя распадаемости

92

полученных капсул. Результаты исследования оценки качес
тва капсул
оксима пиностробина в дозе 50 мг представлена в таблице 5.1.3


Таблица
5.1.3

-

Показатели качества капсул
оксима пиностробина
50 мг




мод
ельной
смеси

m
ср
,
мг

-
Δ

m,

%

+
Δ

m,

%

Распадаемость,

мин

Однородность
дозирования

Содержание
оксима
пиностробина
, мг

1

197,9

1,16

3,28

Соответствует

Соответствует

49,4

2

196,4

1,75

3,31

Соответствует

Соответствует

49,0

3

197,9

2,68

3,64

Соответствует

Соо
тветствует

50,4


По результатам экспериментальных иследований определена
показатель средняя масса, однородность дозирования капсул оксима
пиностробина, распадаемость
и
определение количественного
содержания
действующего вещества.

На основе изучения техн
ологических свойств капсулируемой массы
установлен оптимальный состав гранул для капсулирования оксима
пиностробин
а, который приведен в таблице 5.1.4
.


Таблица 5.1.4
-

Оптимальный состав гранул
оксима пиностробиа
с массой
содержимого
0,
2

г


Наименование ко
мпонентов

Содержание

компонентов на
одну капсулу
, г

Оксим пиностробина

0,0500

Лактоза

0,0510

Крахмал

0,0410

Поливинилпирролидон

0,0080

Полоксамер
Kolliphor P188 micro

0
,0308

Кальция стеарат

0,0002

Натрия лаурилсульфат

0,020

Спирт этиловый

q
.
s.

И
того

0,2000


93

При стандартизации капсул возникает необходимость изучения
высвобождения активной субстанции из лекарственной формы. Проведена
биофармацевтическая оценка предлагаемой лекарственной формы.
Использовали методику
in vitro



тест «Растворения», ме
тод вращающейся
корзинки.
Исследуемым объектом служили капсулы модели №1.

Изучение кинетики
высвобождения действующего вещества из капсул
с оксимом пиностробина проведено на приборе «вращающаяся корзинк
а»
фирмы «ERWEKA ZT 504» (
Германия). Содержание оксима

пиностробина в
пробах определяли методом ВЭЖХ по разработанной нами методике.

Для проведения анализа по тесту «Растворение» подобраны
экспериментальные условия: среда


0,1 М кислота хлороводородная (ГФ РК,
т. 2, с. 60), объем среды
-

500 мл, скорость вр
ащения


75 об/мин, время
растворения 60 мин.

Одну к
ап
сулу оксима пиностробина помещали в корзинку, включали
прибор и проводили испытание. В процесе исследования че
рез каждые 10
минут в течении 60

минут отбирали по 25 мл пробы. Полученный
исследуемый раст
вор
фильтровали через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм,
отбрасывая первые 2
-
3 мл фильтрата.

10 мл фильтрата помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл,
доводили объем раствора ацетонитрилом до метки и перемешивали.

Полученный фильтрат хроматографировали на
жидкостном
хроматографе Agilent 1100 Series (

Packard
)
c

УФ
-
детектором в
условиях:



колонка размером 4.6 x 150 мм, заполненная силикагелем
октадецилсилильным для хроматографии с размером частиц 5 мкм
(например, Zorbax SB
-
C
18
);



подвижная фаза
ац
етонитрил


кислота уксусная
1% (
50:50
);



скорость подвижной фазы 0,5 мл/мин;



температура колонки комнатная;



детектирование при длине волны 279 нм.


94

Время хроматографирования 30 мин.

Содержание оксима пиностробина в одной капсуле (Х) в
миллиграммах выч
исляли по формуле:




S
1



среднее значение площадей пиков оксима пиностробина,
вычисленное из хроматограмм испытуемого раствора;

S
0

-

среднее значение площадей пиков оксима пиностробина,
вычисленное из хроматограмм СО оксима пиностр
обина;

а

-

масса навески препарата в миллиграммах;

m
0
-

масса навески СО оксима пиностробина в миллиграммах;

Р


содержание оксима пиностробина в СО оксима пиностробина в
процентах.

Результатыисследования капсул оксима пиностробина по тесту
«Растворение»
представлены в таблице 5.1.
5

и на рисунке 5.1.
5
.


Таблица

5.1.
5

-

Высвобождение
оксима пиностробина

из капсул


Время отбора
пробы, мин

Количество высвободившегося оксима
пиностробина

г

%

1

0,0055

10,8

5

0,0106

19
,
7

10

0,0159

3
0
,7

15

0,0221

4
4
,
6

20

0
,0269

5
2
,2

25

0,037
1

64
,
7

30

0,0378

76
,
8

35

0,0428

79
,
9

40

0,0431

84
,
1

45

0,0434

86,3

60

0,0439

86,7




95


Рис
. 5.1.1.

Скорость высвобождения
оксима пиностробина

из капсул


Оксим пиностробина высвобождается из
капсул за 45 минут
составляет 86
%, при зн
ачении рН 0,1М
кислоты хлороводородной.


Таким образом, результаты теста «Растворения» свидетельствовали о
высокой потенциальной биодоступности оксима пиностробина в капсулах.

По полученным параметрам можно сделать заключение о хорошей
воспроизводимости да
нной методики. Достоверность данной методики
установлена по результатам анализа растворов с использованием
стандартного образца

оксима пиностробина.


5.2
.

Оценка качества капсулированной формы о
ксима
пиностробина 50 мг


С учетом физико
-
химических свойств и

в соответствии с
требованиями нормативных документов, разработана спецификация качества
на капсулы

о
к
сима пиностробина 50 мг
.
Результаты исследования образцов
капсул

«Окси
ма
пин
остробина
» приведен
ы в таблице 5.2.1
.

Таблица
5.2.1



Показатели к
ачества опыт
ных образцов

капсул
«
Оксима
пиностробина
»

Наименование
показателей

По проекту АНД

Результаты

010
3
1
6

020
3
1
6

030
3
1
6

1

2

3

4

5

Описание

Твердые капсулы
желудочно
растворимые
капсулы размером № 2, наполненные
порошком от белого до белого с
желтоватым оттен
ком цвета.

Соответ
-
ствует

Соответ
-
ствует

Соответ
-
ствует


96

1

2

3

4

5

Средняя масса
капсул, г

0,2

0,2015

0,2007

0,2014

Потеря в массе
при высушивании

Не более 5.0 %

3,12

3,28

2,88

Отклонение от
средней массы, %

±10

+2,2



1,0

+2,7


1,6

+3,0

-

1,4

Распад
аемость

Не более 20 мин.

6 мин
45 сек.

5 мин
15 сек.

5 мин
10 сек.

Растворение, %

Не менее 75%

86

84

86

Количественное
определение, мг

от 48,61 до 53,75

50,45

49,85

49,61


Разработанная спецификация качества опытных образцов «Оксима
пиностробина 50 мг,

капсулы» включена в проект АНД на лекарственную
форму.

Основными параметрами качества капсул является: внешний вид,
распадаемость, потеря массы при высушивании, отк
лонение от средней
массы в (%),

растворение, количественное содержание действующего
вещест
ва
.


Контроль основных показателей качества проводили сразу после
производства капсул, затем через каждые 3 месяца в течение первого
полугода и каждые 6 месяцев в течение последующего периода.

Капсулы всех серий по внешнему виду, количественному содержанию

действующего вещества, микробиологической чистоте соответствовали
проекту аналитичес
кого нормативного документа на

капсул
ы
оксима
пиностробина в течение всего периода хранения. По результатам
исследования срок хранения капсул оксима пиностробина составила

2 года,
хранение лекарственного средства проводили в сухом, защищенном от света
месте, при температуре не выше 30°С.



97

5.3
.

Разработка технологии опытно
-

промышленного
регламента
на получения
капсул

о
ксима пиностробина 50 мг


В
опытно
-

промышленный регламе
нт входят следующие разделы:

1.

Характеристика конечной продукции производства

2.

Химическая схема производства

3.

Технологическая схема производства

4.

Аппаратурная схема производства и спецификация
оборудования

5.

Характеристика сырья, материалов, полуфабрикатов

6.

Изложение технологического процесса

7.

Материальный баланс

8.

Переработка и обезвреживание отходов производства

9.

Контроль производства и управление технологическим
процессом

10.

Техника безопасности, пожарная безопасность и
производственная санитария

11.

Охрана окру
жающей среды

12.

Перечень производственных инструкций

13.

Информационные материалы


Характеристика конечной продукции производства

Наименование продукции

Оксима пиностробин 5
0

мг, капсулы

Основное назначение продукции

Гепатопротекторное

Краткое описание внешн
его вида и характерных свойств
продукции

Твердые непрозрачные капсулы, наполненные гранулами от белого до
белого с желтоватым оттенком цвета. Средняя масса капсулы 200 мг ± 10 %.

98

Содержание оксима пиностробина в одной капсуле должно быть от 46,25 до
53,75
мг, считая на среднюю массу содержимого капсулы.


Виды и формы упаковок, условия хранения и срок годности

По 25 капсул в банки из стекломассы с треугольным венчиком

типа
БДС 30
-
27,5
-
ОС по ТУ 64
-
2
-
239
-
92 и крышками натягиваемыми
полиэтиленовыми типа 1.2
-
27
,5 по ОСТ 64
-
2
-
87
-
81 или в банки из
стекломассы с винтовой горловиной типа БВ
-
30
-
28
-
ОС
-
I

по ОСТ 64
-
2
-
71
-
80 с
навинчивающимися пластмассовыми крышками типа 1.1 по ОСТ 64
-
2
-
87
-
81
и прокладками из картона с двусторонним полиэтиленовым покрытием по
ТУ 64
-
2
-
269
-
78. Свободное пространство в банке заполняют ватой
медицинской гигроскопической по ГОСТ 5556
-
81. На банку наклеивают
этикетку из бумаги этикеточной по ГОСТ 7623
-
86 или писчей по ГОСТ
18510
-
87. Каждую банку вместе с листком
-
вкладышем на государственном и
р
усском языках помещают в пачку из картона потребительской тары марки А
или хром
-
эрзац по ГОСТ 7933
-
89 Е.

Допускается текст инструкции по применению наносить на пачку.

По 10 капсул в контурную ячейковую упаковку из пленки
поливинилхлоридной марки ЭП
-
73 по Г
ОСТ 25250
-
88 или аналогичной
импортной и фольги алюминиевой печатной лакированной по ТУ 48
-
21
-
270
-
94 или аналогичной импортной.

На этикетке или контурной ячейковой упаковке и пачке указывают
название страны
-
производителя, название фирмы и

ее товарный знак,

название препарата на латинском, государственном и русском языках,
международное непатентованное название, лекарственную форму, дозировку,
количество капсул в упаковке, условия хранения, регистрационный номер,
серию, срок годности,

адрес предприятия


изг
отовителя, предупредительные
надписи: «не применять после истечения срока годности», «отпускать по
рецепту врача».


99

На пачке или контурной ячейковой упаковке дополнительно указывают
штрих
-
код.

Групповая упаковка и транспортная тара в соответствии с ГОСТ 177
68
-
90 Е.

На этикетке групповой тары дополнительно указывают количество
упаковок.

Маркировка транспортной тары в соответствии с ГОСТ 14192
-
96.

Транспортирование в

соответствии с ГОСТ 17768
-
90 Е.


Хранят в защищенном от света ме
с
те при температуре не выше 
30 °С.

Срок годности 2 года.

В связи с отсутствием химических превращений химическая схема
производства не приводится.

Основные стадии технологической схемы получения капсулированной
формы
оксима пиностробина на рисунке 5.3.1.


Изложение технологического п
роцесса


Техноло
гический процесс производства капсул оскима пиностробина
состоит из 4 технологических стадий, включающих в себя 10
технологических операций.


Технологические стадии процесса производства капсул оксима
пиностробина:

ВР 1

Подготовка сырья;

Т
П 1

Гранулирование;

ТП 2

Капсулирование и обеспыливание;

УМО 1

Фасовка, маркировка и упаковка капсул.





100

Технологические стадии процесса производства капсул

оксима пиностробина



Рис.
5.3.1
.
Основные стадии технологического про
цесса производства
капсулированной формы оксима пиностробина


Подготовка сырья


ВР.1

Просеивание и

взвешивание сырья


ВР 1.1

Приготовление

связующего раствора



ВР 1.2

Смешивание
и
увлажнение


порошков

солянокислого

ТП 1.1

Протирка



ТП 1.2

ТП

1
.
3


Сушка гранулята

ТП
2


Капсулирование и

обеспыливание


ТП

1
.
4


Просеивани
е

ТП

2.1


Наполнение капсул

Потери

механические


ТП 2.2

Обеспыливание



ТП 1

УМО

УМО

Гранулирование

Фасовка в банки


Маркировка


УМО 1

Упаковка и маркировка
капсул оксима пиностробина


Исходное сырье со склада

Потери
механические

Капсулы н
а

регенерацию



На
с
клад готовой продукции

4
-
8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

1
8

19

20

21

22

23

Исх
.
сырье

Н
2
О

Кальция стеарат

На анализ

На фасовку

Влажный гранулят

С у х о й г р а н у л я т

Г р а н у л

ы

Капсулы

Отходы

АППАРАТУРНАЯ СХЕМА ПРОИЗВОДСТВА И СПЕЦИФИКАЦИЯ ОБОРУДОВАНИЯ
































Рис. 5.3.2
. Аппаратурная схема производства капсулированной формы оксима пиностробина

2

1

3


Описание технологии капсул
оксима пиностробина

ВР 1 Подготовка сырья

Исходное сырье: оксим пиностробин

и вспомогательные вещества

проверить на соот
ветствие требованиям нормативно
-
технической
документации ВР 1.1.

ВР 1.1 Просеивание и взвешивание сырья

Перед началом смены получить сырье и упаковочные материалы со
склада, доставить сырье к тамбур
-
шлюзу модуля, а упаковочные материалы


в соответствующее

отделение упаковки и передать их оператору под роспись
в накладной.

В развесочной модуля отвесить сырье
.


Просеянное сырье не должно содержать посторонних включений (К
Т

ВР 1.1). Отсевы с сит собирают в сборник отходов 21 и уничтожают
сжиганием по мере нак
опления.

Выход компонентов на технологической операции просеивания и
взвешивания составляет 99,5 % на загруженный продукт.

ВР 1.2 Приготовление
раствора


ТП 1 Гранулирование

Перед началом работы проверить чистоту и сухость оборудования:
смесителя, гранулят
ора, контейнеров
-
сборников, лотков и камер сушильного
шкафа и другого оборудования, а также исправность электропроводки,
приточно
-
вытяжной вентиляции, средств перевозки сырья и полупродуктов.

ТП 1.1 Смешивание и увлажнение порошков

Просеянное и отвешенное

сырье перемешивали в смесителе
бочкообразный марки «HD
-
20», в который загружали поочередно все
компоненты.

Смеситель закрыть и включить в работу на скорости 1 (70 об/мин) на
30 минут.

Выгрузить влажную смесь в тарированный сборник влажного
гранулята 12,
взвесить, прикрепить межоперационный ярлык и передать на
стадию протирки.


103

ТП 1.2 Протирка

Протереть гранулят через сито с диаметром пор 3 мм в грануляторе 13
для формирования гранул, выгрузить в тарированный сборник влажных
гранул 14, взвесить, прикрепить
межоперационный ярлык и передать на
стадию сушки.

ТП 1.3 Сушка гранулята

Влажные гранулы разложить совком на лотки сушильного шкафа 15
слоем 1,5
-
2 см.

Запрограммировать шкаф на продувку в течение 1 часа при
температуре 21
о
С и сушку в течение 3 часов при т
емпературе 45
о
С.

Во время
сушки через 2 часа после выхода шкафа на режим перемешать и разрыхлить
гранулят на лотках.

После сушки выгрузить гранулят в сборник сухих гранул 16, взвесить,
прикрепить межоперационный ярлык и передать на стадию просеивания. Из

сборника 16 отобрать среднюю пробу для определения потери в массе при
высушивании.

ТП 1.4 Просеивание

Просеять высушенный гранулят через сито с диаметром пор 1 мм в
грануляторе 17, выгрузить в тарированный сборник гранул 18, взвесить,
прикрепить межоперац
ионный ярлык и передать на стадию опудривания.

ТП 1.5 Опудривание гранулята

Рассчитать количество опудривающих веществ с учетом потерь
гранулята при смешивании, увлажнении порошков, протирке, сушке и
просеивании по формуле:


ОВ
1
=

где
ОВ
1


рассчитанное с учетом потерь гранулята количество
опудривающих веществ, кг;

ОВ


исходное количество опудривающих веществ, кг;

m
1

-
полученная масса сухих гра
нул, кг;


104

m

-

исходная масса сухих гранул, кг.

Высыпать в сборник 18 с просеянным гранулятом опудривающие
вещества: кальция стеарат и аэросил из сборников 7, 8, перемешать совком.

Выгрузить смесь в двухконусный смеситель для опудривания
19.
Опудривание вест
и 15 минут.

Выгрузить опудренные гранулы в тарированный сборник
капсулируемой массы 20, взвесить, отобрать пробу на анализ в лабораторию
контрольно
-
аналитических работ и стандартизации фитопрепаратов,
прикрепить межоперационный ярлык и передать на стадию к
апсулирования.

Выход продукта на стадии составляет 97 % от теоретически
рассчитанного с учетом потерь на стадии ВР 1 количества готовых к
капсулированию гранул.

ТП 2 Капсулирование и обеспыливание

Подготовка машины для наполнения твердых желатиновых капсул

к
работе
.

Перед началом работы проверить комплектность машины, чистоту
загрузочного бункера и столика машины,
а также исправность
электропроводки, приточно
-
вытяжной вентиляции, средств перевозки
полупродуктов и продуктов.

ТП 2.1 Наполнение капсул

Оператор
у загрузить капсулами устройство для ориентации пустых
твердых желатиновых капсул на 250 капсул машины для наполнения капсул
22

(марки

«JTJ


100A»

. После размещения капсул в ячейках и ориентации
капсул крышками вверх оператору зажать струбцинами рабочие
емкости
капсул и открыть их крышки, подняв верхнюю пластину. Отпустив
струбцины, установив машину на вибратор, оператору подать гранулят из
загрузочного бункера и заполнить капсулы с помощью шпателя. После
заполнения всех капсул верхнюю пластину с крышками

поставить на место и
закрыть капсулы.


105

Во время капсулирования оператору следить за работой машины и
качеством капсул, каждые 30 минут проверять внешний вид и среднюю
массу капсулы.

ТП 2.2 Обеспыливание

Закрытые крышками капсулы обеспылить. Оператору выгр
узить
готовые капсулы в тарированный сборник капсул 23, взвесить,
промаркировать их карточкой продукта и сдать на склад до получения
протоколов анализа лаборатории контрольно
-
аналитических работ и
стандартизации фитопрепаратов и разрешения на упаковку.

Нек
ондиционные капсулы и отходы собрать в сборник отходов 21.

От каждой серии оператору передать 60 штук капсул в лабораторию
контрольно
-
аналитических работ и стандартизации препаратов для анали
за
на соответствие требованиям
АНД РК.

При получении протокола а
нализа лаборатории контрольно
-
аналитических работ и стандартизации с заключением о соответствии
качества капсул требованиям нормативной документации контейнер с
капсулами со склада промаркировать карточкой с указанием серии, номера
протокола анализа и надп
исью «одобрено» и передать на стадию упаковки.

Выход готовых капсул на стадии составляет 97 %.

УМО 1 Фасовка, маркировка и упаковка капсул

УМО 1.1 Фасовка капсул в банки и блистеры

Фасовка капсул в банки

УМО 1.2 Маркировка

Упаковщику на этикетках или конту
рной ячейковой упаковке и
пачках проставить серию и срок годности препарата,

этикетки из бумаги
этикеточной по ГОСТ 7623
-
86 наклеить на банки.

Каждую банку с капсулами арглабина нативного 50 мг № 25 или 3
блистера № 10 вместе с листком
-
вкладышем на государ
ственном и русском
языках поместить в пачку из картона потребительской тары марки А или
хром
-
эрзац по ГОСТ 7933
-
89 Е.


106

Таким образом, на

основе лабораторного регламента разработан и
утвержден опытно
-
промышленный регламент на производство
капсул
оксима пин
остробина 50 мг

(Приложение Ж

.

В условиях опытно
-
промышленного производства на
«
Карагандинском фармацевтическом
заводе
»

разработан процесс капсулирования субстанции оксима
пиностробина с выпуском готовой лека
рственной формы нового препарата
.


5.
4
.

Биофар
мацевтическое исследование капсулированной
формы окс
има пиностробина. Исследование а
бсолютной биодоступности
капсул оксима пиностробина


Скорость и полнота всасывания лекарственных веществ являются
основными показателями для установления терапевтической э
ффективности
препарата.

Изучение фармакокинетики оксима пиностробина в плазме крови
крыс проводилось после его введения внутрь в дозах 50,0 и 500 мг/кг.

На рисунке
5.4.1.

представлены усредненные фаромкинетические
кривые оксима пиностробина, где исследуемо
е соединение определяется на
протяжении 4 часов после однократного перорального введения капсул и
субстанции препарата.







Рис
.

5.4.1
.

Кинетические кривые оксима пиностробина в плазме кро
ви
кроликов после его внутрижелудочного введения в виде капсул доза
(36,5±2,7 мг/кг) и субстанции (40 мкг/кг)



107

В таблице

5.4.1.

и
5.4.2.

представлены индивидуальные концентрации
оксима пиностробина в плазме крови животных после введения капсул и
субстанци
и препарата. Из фармакокинетических кривых видно, что для
субстанции пиностробина характерно две максимальные концентрации.
Первая и основная максимальная концентрация наблюдается через 0,5 часов,
а вторая


через 1 час что, возможно, объясняется энтерогеп
атической
рециркуляцией.

Сравнительный анализ основных фармакокинетических параметров
(таблица
5.4.3.

и
5.4.4.
) оксима пиностробина показал, что изучаемое
соединение всасывается из желудочного
-
кишечного тракта (ЖКТ) с разной
скоростью (
С
max
/

AUC
0→
t



для
капсул этот параметр составил 0,457±0,050;
для субстанции


0,564±0,069 ч
-
1
).


Таблиц
а
5.4.1

-

Концентрация оксима пиностробина (мгк/мл) в плазме крови
кроликов после его однократного внутрижелудочного введения в виде капсул
в дозе 36,5±2,7 мг/кг


№№


п/п

Время (час)

0,0

0,25

0,5

0,75

1

1,5

2

3

4

1

0,00

0,095

0,148

0,178

0,152

0,167

0,125

0,084

0,042

2

0,0

0,136

0,194

0,238

0,195

0,209

0,143

0,107

0,071

3

0,0

0,085

0,129

0,169

0,134

0,150

0,118

0,096

0,035

4

0,0

0,057

0,184

0,158

0,207

0,151

0,095

0,
046

0,021

5

0,0

0,039

0,155

0,204

0,226

0,108

0,131

0,100

0,064

6

0,0

0,027

0,086

0,128

0,178

0,124

0,128

0,071

0,050

7

0,0

0,064

0,143

0,138

0,244

0,172

0,140

0,114

0,082

8

0,0

0,147

0,118

0,253

0,321

0,240

0,163

0,122

0,094

x

0,0

0,081

0,145

0,183

0
,207

0,163

0,130

0,093

0,057

SD

0,0

0,043

0,035

0,045

0,059

0,043

0,020

0,025

0,025

S x

0,0

0,015

0,012

0,016

0,021

0,015

0,007

0,009

0,009

C.V.%

0,00

53,3

24,1

24,7

28,3

26,1

15,2

26,8

43,2



108

Таблица
5.4.2

-

Концентрации оксима пиностробина (мгк/мл) в
плазме крови
кроликов после его однократного внутрижелудочного введения в виде
субстанции в дозе 40 мг/кг


№№


п/п

Время (час)

0,0

0,25

0,5

0,75

1

1,5

2

3

4

1

0,00

0,074

0,205

0,158

0,154

0,120

0,107

0,071

0,036

2

0,0

0,157

0,318

0,252

0,274

0,173

0,14
9

0,095

0,051

3

0,0

0,058

0,197

0,141

0,153

0,108

0,084

0,035

0,016

4

0,0

0,026

0,105

0,168

0,132

0,097

0,064

0,024

0,010

5

0,0

0,062

0,249

0,199

0,208

0,137

0,097

0,060

0,045

6

0,0

0,035

0,120

0,112

0,118

0,102

0,071

0,042

0,023

7

0,0

0,039

0,157

0,1
30

0,139

0,086

0,065

0,037

0,014

8

0,0

0,210

0,314

0,218

0,243

0,149

0,117

0,100

0,040

x

0,0

0,083

0,203

0,172

0,178

0,122

0,094

0,058

0,029

SD

0,0

0,066

0,081

0,047

0,057

0,029

0,030

0,029

0,016

S x

0,0

0,023

0,029

0,017

0,020

0,010

0,010

0,010

0,006

C.V.%

0,00

79,5

39,0

27,6

32,1

24,2

31,3

49,1

53,0


То есть, оксим пиностробин из капсул медленне всасывается по
сравнению с субстанцией, и соответственно, время достижения
максимальной концентрации (
t
max
) составило в среднем для капсул


0,91±0,13 час,
а для субстанции


0,53±0,09 час. Таким образом, оксим
пиностробин практически в 2 раза медленнее всасывается из ЖКТ в случае
его введения в виде капсул по сравнению с субстанцией препарата.

Средняя максимальная концентрация оксима пиностробина,
определяе
тся в плазме крови кроликов (С
max
) составила как для капсул, так и
для субстанции


0,22 мкг/мл. Индивидуальный анализ основного параметра,
характеризующего степень биодоступности действующего вещества из
лекарственной формы AU
0→
t

указывает на значительн
ую вариабельность
данного параметра. Среднее значение AU
0→
t

для капсул составило
0,482±0,098 и для субстанции


0,387±0,136 мкг/мл×ч.



109

Таблица

5.4.3

-

Фармакокинетические параметры оксима пиностробина у
кроликов после его однократного введения в виде капс
ул



№№


Фармакокинетические параметры

AUC
0→
t

мкг/мл×ч

t
max

час

С
max

мкг/мл

С
max
/

AUC
0→t

ч
-
1

MRT

час

f
отн.

%

1

0,444

0,750

0,176

0,39628

1,764

121,2

2

0,570

0,750

0,238

0,41791

1,761

96,5

3

0,423

0,750

0,169

0,39941

1,821

152,1

4

0,381

1,000

0,207

0,54366

1,554

158,3

5

0,469

1,000

0,226

0,48226

1,855

129,0

6

0,381

1,000

0,178

0,46704

1,892

141,6

7

0,524

1,000

0,244

0,46576

1,912

240,3

8

0,661

1,000

0,321

0,48544

1,803

132,5

x

0,482

0,91

0,22

0,457

1,80

146,4

SD

0.098

0.13

0.05

0.050

0.11

42.5

S x

0.035

0.05

0.02

0.018

0.04

15.0

C.V.%

20.3

14.3

22.8

11.0

6.2

29.0


Таблица
5.4.4

-

Фармакокинетические параметры оксима пиностробина у
кроликов после его однократного введения в виде субстанции



№№


Фармакокинетические параметры

AUC
0→
t

мкг/мл
×ч

t
max

час

С
max

мкг/мл

С
max
/

AUC
0→
t

ч
-
1

MRT

час

1

0,396

0,500

0,205

0,51719

1,694

2

0,603

0,500

0,318

0,52704

1,604

3

0,317

0,500

0,197

0,62243

1,501

4

0,250

0,750

0,168

0,67234

1,490

5

0,429

0,500

0,249

0,57991

1,596

6

0,269

0,500

0,120

0,44630

1,6
76

7

0,270

0,500

0,157

0,58256

1,539

8

0,559

0,500

0,314

0,56172

1,565

x

0,387

0,53

0,22

0,564

1,58

SD

0,136

0,09

0,07

0,069

0,07

S x

0,048

0,03

0,03

0,024

0,03

C.V.%

35,2

16,6

35,5

12,2

4,7


110

Относительная биологическая доступность (
f
отн.
) оксима
пин
остробина, определяемая отн
ошением индивидуальных значений

AUC
0→
t

и доз составляет для капсул по отношению к субстанции

в среднем
146,4±42,5%
.


Заключение по 5 главе

Приведены исследования технологических свойств субстанции и
модельных см
есей капсул оксима

пиностробина.

Обоснована технология
изготовления гранул для наполнения капсул.
Подобра
н

оптимальный состав
капсулированной формы с оксимом пиностробина

и проведен

комплекс
физико
-
химических, технологических и биофармацевтических исследований
оксима пиност
робина в капсулах
.


Проведена биофармацевтическая оценка предлагаемой
лекарственной
формы.
По данным анализа теста «Растворения» о
ксим пиностробина
высвобождается из капсул за 45 минут
и
составляет 86
%, при значении

рН
0,1М
кислоты хлороводородной.

Относит
ельная биологическая доступность

f
отн.
) оксима пиностробина, определяемая отношением индивидуальных
значений AU
0→
t

и доз составляет для капсул по отношению к субстанции в
среднем 146,4±42,5%.

Подготов
лена

нормативн
ая

документаци
я на субстанцию оксима
пи
ностробина и

лекарственную форму в виде проектов АНД

(Приложение
Е

. Н
а

основе лабораторног
о регламента разработан и утвержден опытно
-
промышленный регламент на производство
капсул оксима пиностробина 50
мг

(Приложение Ж)
.
Н
а

базе

«Карагандинском фармацевти
ческом заводе»
внедрены в производство эффективные, экономичные и экологически
безопасные технологии получения субстанций пиностробина и оксима
пиностробина

и

о
рганизован выпуск опытно
-
промышленных

партий
капсулированной формы «Оксима пиностробина 50 мг, к
апсулы», для
проведения
клинических исследований (Приложение З).




111

ВЫВОДЫ



1.
О
пределены оптимальные параметры режима
экстракции

почек
тополя бальзамического с использованием
СО
2
-
газа в

сверхкритическом
состоянии, обеспечивающие количественное извлечение
пиностробина.

2. Впервые
для выделения и очистки флавоноида пиностробина из
СО
2
-
экстракта почек тополя бальзамического использована центробежная
хроматография распределения. Экспериментально подобраны оптимальные
режимы выделения пиностробина из углекислот
ного экстракта почек тополя
бальзамического с применением центробежной хроматографии
распределения, и синтеза оксима пиностробина, обеспечивающие
количественные выходы качественных целевых продуктов.

3.
Впервые разработан

оптимальный состав и технология но
вого
лекарственного средства
-

капсулы оксима пиностробина

и определены его

биофармацевтически
е

характеристики.

4.
Разработаны и утверждены нормативные документы

в виде
проектов

на субстанцию пиностробина,
оксима
пиностробина и окс
има
пиностробина 50 мг, к
апсулы
.

Н
а основе лабораторных регламентов
разработаны
опытно
-
промышленные регламенты на производство
субстанци
и

пиностробина (
ЛП
40
7
6
1
8
19
-
01
-
14, ОПР 40653870
-
01
-
14
),
оксима
пиностробина (ОПР ФД650050337Р
-
04
-
16


и капсулированной формы

оксима
пиностробина
50 мг

(ОПР

ФД650050337Р
-
05
-
16
).

Пиностробин включен в
качестве стандартного образца в
Государственную Ф
армакопею Республики
Казахстан (ГФ РК, Т.
III
., 2014).

5.
На базе ТОО «Карагандинский фармацевтический завод»
организован выпуск субстанции пиностробина,

оксима пиностробина, а
также опытных партий лекарственного средства
«О
кс
има пиностробина 50
мг, капсулы».



112

ПРАКТИЧЕСКИЕ
Р
ЕКОМЕНДАЦИИ ПРАКТИЧЕСКИЕ

Р
ЕКОМЕНДАЦИИ


Установлено что почки тополя бальзамического является
перспективным источником для получения би
ологически активных
флавоноидов.

Предложена новая технология выделения
субстанции пиностробина с
применением центробежной хроматографии распределения и проведен
синтез оксима пиностробина. Разработанные технологии характеризуются

высокой производительность
ю, сравнительной автоматизацией и
значительным сокращением продолжительности технологического процесса,
искл
ючением токсичных растворителей.

По результатам исследований
разработаны проекты АНД РК на
с
убстанцию пиностробина, оксима пиностробина

и капсурован
ной формы

«Оксима пиностробина 50 мг, капсулы»
. Н
а основе лабораторных
регламентов разработаны

и утверждены опытно
-
промышленные регламенты
на производство субстанции пиностробина (ЛП
40
7
6
1
8
19
-
01
-
14, ОПР
40653870
-
01
-
14),
субстанции оксима пиностробина (ОПР
ФД650050337Р
-
04
-
16


и лекарственной формы оксима пиностробина в капсулах
(ОПР

ФД650050337Р
-
05
-
16

.

П
иностробин включен в качестве национального стандартного
образца в Государственную Фармакопею Республики Казахстан,
который
предназначен для идентификации и

количественного определения в
лекарственном
растительном сырье и лекарственных растительных
препаратах
(ГФ РК, Т.
III
., 2014⤀;

На

Карагандинском фармацевтическом заводе
производство внедрен
а
в производство

технология по
л
учения субстанции

оксима пиностроби
на,

лекарственной формы
«О
ксима

пиностробина 50 мг, капсулы
»

и о
формлен
АК
Т

внедрения
от 15.03.2017 г.



113

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ



1.

Патент РК № 5696 от 21.06.2001 г. С.М. Адекенов, А.Х. Токпаев,
Э.А. Кульмагамбетова, Т.С. Сейтембетов, Л.Н. Прибытко
ва
«Гепатопротекторное и антиокс
и
дантное средство «Салсоколлин».

2.

Рахимова А.К., Арыстанова Т.А. Изучение гепатопротекторной
активности таблеток «Рувимин» // Фармация Казахстана.
-

20084
-

№98.
-

С.
36
-
38.

3.

Патент РК № 20298 от 17.11.2008 г. Л.Н. Пучкина, Г.
Е.
Жусупова, А.У. Тулегенова «Капсулы «Лимонидин», обладающие
гепаторпротекторным действием».

4.

Патент РК №19034 от 15.01.2008. М.П. Ирисметов, Ш.К.
Айнабаева, А.Б. Шукирбекова., Т.А. Арыстанова «Композиция в виде капсул
«Биаскин», обладающая антиоксидантной

и гепатопротекторной
активнгостью».

5.

Дроговоз С.М., Щекина Е.Г., Ушакова А. Современные подходы
к терапии заболеваний гепатобилиарной системы //Провизор.
-

2008.
-

№ 8.
-

С. 19
-
22.

6.

Буеверов А.О. Оксидативный стресс и его роль в повреждении
печени //Российс
кий журнал гастроэнтерологии, гепатологии,
колопроктологии.
-

2002.
-

№ 4.
-

С. 21
-
25.

7.

Меньщикова Е.Б., Зенков Н.К., Ланкин В.З. и др. Окислительный
стресс: Патологические состояния и заболевания.
-

Новосибирск: АРТА,
2008.
-

284 с.

8.


Марков Х.М. Оксидантны
й стресс и дисфункция эндотелия
//Патологическая физиология и экспериментальная терапия.
-

2005.
-

№ 4.
-

С. 5
-
9.


114

9.

Плотников М.Б., Тюкавкина Н.А., Плотникова Т.М.
Лекарственные препараты на основе диквертина.
-

Томск: Изд
-
во Том. Ун
-
та,
2005.
-

228 с.

10.

Сарат
иков А.С., Венгеровский А.И., Чучалин В.С. Экстракт
солянки холмовой (лохеин)


эффективная защита печени.
-

Томск:
STB
,
2000.
-

114 с.

11.

Хахулина М.А., Нестерова О.В., Маркарян А.А., Решетняк В.Ю.
Новый стоматологический растительный препарат местного дейст
вия
//Химическая технология.


2009.
-

№ 1.
-

С. 36
-
39.
Clerco

E
.
Molecular

targets

for

antiviral

agents

//
J
.
of

Pharmacology

and

Experimental

Therapeutics
, 2000,
V
.297, №1,
P
.1
-
10.

12.

Rusak G., Krajacic M., Plese N. Inhibition of tomato bushy stunt virus
in

Antiviral. Res, 1997, V.36, №2,
Р
.125
-
129.

13.

Feldman K.S., Sahasrabudhe K., Smith R.S., Scheuchenzuber W.J.
Immunostimulation by plant polyphenols: a relationship between tumo
r necrosis
factor
-
alpha production and tannin structure //
., 1999,
V.9, №7, P.985
-
990.

14.

Барабой В.А. Биологическое действие растительных фенольных
соединений. Киев, Наукова думка, 1976, 260с.

15.

al agents

// J. of Pharmacology
and Experimental Therapeutics, 2000, V.297, №1, P.1
-
10.

16.

Bakay M., Mucsi I. Effect of flavonoids and related substances.

Acta Microbiol.
Acad. Sci. Hung.,

1968, V.15, №3,
Р
.223
-
227.

17.

Rusak G., Krajacic M., Plese N. Inhibition of tomato bushy stunt virus
infection using a

Antiviral. Res, 1997, V.36, №2,
Р
.125
-
129.

18.

Пономарев В.Д. Экстрагиро
вание растительного сырья
-
М.:
Медицина, 1976.
-

С. 15
-
20.


115

19.

Патент РФ №2228761 опубл. 20.05.2004г.

МКИ
С
1

А61 К35/78,
А61Р25/32 Средство снижающее токсическое действие алкоголя, и способ
его получения. Мясников Д.Н., Кашленский А., Нужный В.П.

20.

Патент РФ №2
177330 опубл. 27.12.2001г. МКИ С
1

А61 К35/78
Способ получения гепатопротекторного средства. Спрыгин В.Г., Кушнерова
Н.Ф., Добряков Ю.И.

21.

Патент РФ № 2179031опубл. 10.02.2002г.
МКИ
С
1

А61
К35/78Способ получения гепатопротекторного средства. Кушнерова Н.Ф
.
,
Спрыгин В.Г.

22.

Патент РФ № 2244553опубл. 20.01.2005г. МКИ С
1

А61 К35/78
-
А61К31/05 Способ получения гепатопротекторного средства. Федореев
С.А., Музарук Т.И., Булгаков В.П., Гибко Л.И.

23.

Яковенко А.В. Григорьев П.Я. Хронические заболевания печени:
диаг
ностика и лечение // Российский медицинский журнал .
-

2003.


т.11.
-

№ 5


С. 19
-
20.

24.

ФС 42
-
2256
-
84 «Калефлон».

25.

Государственная фармакопея СССР: в 2 вып
-
11
-
е изд. М.:
Медицина, 1989
-
Вып.2.
-

С.146,397.

26.

Государственный реестр лекарственных средств. М.:
Медицина,
2001.
-

С. 1004.

27.

Бабкин В.А.,
Остроухова Л.А.,Трофимова Н.Н. Биомасса
лиственницы:от химического состава до инновационных продуктов
-
Новосибирск: Изд
-
во СО РАН, 2011.
-
236 с.

28.

Лейман З. А. Изучение полифенолов коры лиственницы
сибирской: дисс. канд
. хим. наук: .02.00.10.
-

Алма
-
Ата: КазГУ, 1974.
-

143 с.

29.

Арыстанова Т.А. Создание лекарственных препаратов на основе
компонентов корня солодки и их стандартизация.// Дисс. д.фарм.н. Алматы.
207с.


116

30.

Оболенцева Г.В., Литвиненко В.И., Амосов А.С.
Фармакологичес
кие и терапевтические свойства препаратов солодки. // Хим.
-
фарм.журнал
-
1999 №8
-

24
-
31с.

31.

Бандюкова В.А. Динамика накопления рутина в отдельных
частях растения софоры японской // Ученые записки Пятигорского
фарминститута. Пятигорск, 1959.
-
Т.4.
-
С.52
-
55.

32.

Ко
личественное определение флавоноидов в плодах софоры
японской./ О.С.Охременко и др.. // Разработка исследования и маркетинг
новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр.
-
Пятигорск, 2006.
-
Вып.61.
-
С.269
-
270.

33.

Горбачева Л.А. Целенаправленное фитохимическое
изучение
плодов софоры японской.// Дисс. канд.ф.н.


Курск 1998. 121с.

34.

Арыстанова Т.А. Создание лекарственных препаратов на основе
компонентов корня солодки и их стандартизация // Дисс. д.фарм.н. Алматы.
-
С.20.

35.

Фетхуллина, Г.А. Спектрофотометрическое опред
елние
флавонолов и изофлавонолов настойки софоры японской / Г.А. Фетхуллина,
Т.И. Буленков // Фармация
-
1984.
-
№2.
-
С.42
-
44.

36.

Евразийский патент №011072 от 30
.12.2008 г.
С.М. Адекенов
«Способ получения цитопротекторного средства
».

37.

Предпатент РК №17519 от 16.0
5.2006г. С.М. Адекенов «Способ
получения цитопротекторного средства».

38.


«Салсоколлин» в лечении хронических гепатитов / Н. С.
Умбеталина, Р. С. Досмагамбетова, Р. Д. Конакбаева, Л. Г. Тургунова //
Фармация Казахстана.


2004.
-

Спец. выпуск.
-

С. 25
-
26.

39.

Ис
пользование салсоколлина в клинике / К.Д.Рахимов, С. М.
Адекенов, К. Ж. Мусулманбеков, Ж.А. Вицке, А.Х. Токпаев, Э.А.
Кульмагамбетова //Здравоохранение Казахстана.


1995.
-

№ 11.
-

С. 52
-
54.


117

40.

Рахимова А.К., Кусаинова Д.Д., Гуляев А.Е. Цитопротекторные
сво
йства лекарственных препаратов / Под редакцией академика НАН РК
С.М. А
д
екенова.


Алматы:
NPrin
, 2007.


340 с.

41.

Кусаинова Д.Д, Л.И. Драб, М.З. Шайдаров, С.М. Адекенов
Терапевтическая эффективность препарата «Салсоколлин» при хронических
диффузных заболеван
иях печени //Практическая фитотерапия.


Специальный выпуск.


Москва, 2009.


С. 44

48.

42.


Жабаева А
.Н., Итжанова Х.И. Разработка технологии
сублимационной сушки густого экстракта травы солянки холмовой // Труды
VI

международного Беремжановского съезда по х
имии и химической
технологии.
-

Караганда 2008. С.402
-
403.

43.

Земцова Г.Н., Бандюкова В
.А. Флавоноиды как лекарственные
препараты // Фармация.1982 №3 68
-
70с.

44.

Патент РФ №2205637 опубл.10.06.2003г. МПК
7

А61К31/357,
А61К35/78, А61Р1/00 Гепатопротекторное средст
во «Карсилин». Жаров О.В.,
Новиков С.В.

45.

Белоусов Ю.Б., Моисеев B.., Лепахин В.К. Клиническая
фармакология и фармакотерапия.
-

М.: Универсум паблишинт, 1997,
-

532 с.

46.


Лекарственные препараты зарубежных фирм в России.
-

М.:
Астрафармсервис, 1993, с.350
.

47.


К
уркин В.А., Браславский В.Б., Запесочная Г.Г. Флавоноиды
почек
Populus

deltoids

химия природных соединений
-

1990 № 4 с. 548
-
550.

48.

Поляков В.В. Масло тополя
-

новый природный биологически
активный препарат для медицины и сельского хозяйства //Материалы Респу
б.
Научно
-
метод. конференции. Петропавловск. 1997.
-
Т II.
-

С. 80
-
81.

49.

Григорьев, Д.Н. Анализ рынка биологически активных добавок /
//Бизнес и медицина, 2005.
-
№5.
-

С.35
-
38

50.

Mukherjee, B. Hypolipidemic activity of Catharanthus roseus leaf
extract in mice //
Fitoterapia.


1995.


V.LXVI, N.6.


P. 483
-
487.


118

51.

-
indiced
hypercholesterolemia in rats // Planta med.


1998.


V.64.


P. 138
-
142.

52.

Рогинский, В.А. Фенольные антиоксиданты. Реакционная
способность и эффективн
ость


М.: Наука, 1988.


247 с.

53.

Лекарственные средства. Каталог препаратов, разработанных в
ГНЦЛС.


Харьков: Основа, 1995.
-

265 с.

54.

Дыгай А.М. Применение экстракта шлемника байкальского в
качестве гемостимулятора при цитостатической болезни //Методичес
кие
рекомендации.
-

М., 1992.
-

8 с.

55.

Е.Д. Гольдберг, А.М. Дыгай, В.И. Агафонов Принципы создания
лекарственных препаратов


стимуляторов кроветворения природного
происхож¬дения / //Экспериментальная и клиническая фармакология.


1995.
-

Т.59, № 1.
-

С. 3
-
7.

56.

on the antioxidant defense mechanism and lipid peroxidation in alcoholic liver

866; 1990.

57.

О.Ю. Катикова, Я.В. Костин, В.С. Тишкин Ге
патопротекторное
действие препаратов растительного происхождения //Экспериментальная и
клиническая фармакология.


2002.


Т. 65, №1.


С.41
-
43.

58.

Л.И. Самигуллина, Д.Н. Лазарева Новые перспективы
применения препаратов расторопши пятнистой //Экспериментальна
я и
клиническая фармакология.


2004.


Т.67, №4.


С.77
-
80.

59.

А. Тюкавкина, И.А. Руленко, Ю.А. Колесник Ю.А. Природные
флавоноиды как пищевые антиоксиданты и биологически активные добавки
/Н //Вопросы питания.


1996.
-

№ 2.
-

С. 33
-
38.

60.

И.А. Селиванова, Н.А
. Тюкавкина, Ю.А. Колесник
Биофлавоноиды как микронутриенты, лекарственные средства и
биологически активные добавки к пище //Актуальные проблемы создания
новых лекарственных препаратов природного происхождения: докл. II
междунар. съезда.


Санкт
-
Петербург,

1998.
-

С. 26
-
34.


119

61.

Жанымханова П.Ж., Мукушева Г.К. Лекарственные препараты на
основе природных флавоноидов //
Научно
-
практи
ческий журнал
«Фармацевтический бюллетень».


Караганда
,

2014.


№1
-
2.
-
С. 5
-
21.

62.

Chaoyang Maa, Liming Hub, Qianyun Fua, Xiaohong Gua
, Guanjun
Taoa, Hongxin Wanga Separation of four flavonoids from
Rhodiola rosea

by on
-
line combination of sample preparation and counter
-
current chromatography
//Journal of Chromatography A.
-

2013.


Vol. 1306.


P. 12

19.

63.

H. Yin, S. Zhang, L. Long, H.
Yin, X. Tian, X. Luo, H. Nan, S. He
The separation of flavonoids from
Pongamia pinnata

using combination columns
in high
-
speed counter
-
current chromatography with a three
-
phase solvent system
//Journal of Chromatography A.
-

2013.


Vol. 1315
.
-

P. 80

8
5
.


64.

Liu R., Li A., Sun A., Cui J., Kong L.
Preparative isolation and
purification of three flavonoids from the Chinese medicinal plant

Epimedium
koreanum

Nakai by high
-
speed counter
-
current chromatography

//
Journal of
Chromatography A.


2005.


Vol. 1064,

№ 1.


Р
. 53
-
57.

65.

Tian G., Zhang U., Zhang T., Yang F., Ito Y.
Separation of flavonoids
from the seeds of

Vernonia anthelmintica

Willd by high
-
speed counter
-
current
chromatography

//
Journal of Chromatography A.


2004.
-

Vol. 1049, № 1
-
2.


Р
.
219
-
222.

66.

D
elaunay J.
-
., astagnino ., hze ., Vercauteren J. Preparative
isolation of polyphenolic compounds from
Vitis vinifera

by centrifugal partition
chromatography //Journal of Chromatography A.
-

2002.


Vol. 964, Iss. 1

2.
-

P.
123

128.

67.

Jinfang Xu, Ji
anguang Luo, Lingyi Kong Simultaneous separation of
triterpenoid saponins and flavonoid glycosides from the roots of
Glycyrrhiza
uralensis

Fisch by pH
-
zone
-
refining counter
-
current chromatography //J. Sep. Sci.
-

2013.


Vol. 36.


P. 3295

3301.


68.

Qianqia
n Xie, Li Yin, Guoliang Zhang, Yun Wei Separation and
-
sulphate from
Flaveria bidentis

(L.) Kuntze by

120

counter
-
current chromatography comparing two kinds of solvent systems //J. Sep.
Sci.


2012.


Vol. 35.


P. 159

165.

69.

Патент

РФ №2205637 опубл.10.06.2003г. МПК
7

А61К31/357,
А61К35/78, А61Р1/00 Гепатопротекторное средство «Карсилин». Жаров О.В.,
Новиков С.В.

70.

Белоусов Ю.Б., Моисеев B.., Лепахин В.К. Клиническая
фармакология и фармакотерапия.
-

М.: Универсум паблишинт, 1997,
-

53
2 с.

71.

Поляков В.В, Лежнева М.Ю. Почки тополя
-

сырье, содержащее
биологически
-
активные вещества //тРазработка теорет. основ и создание
ресурсосберегающих экол. чистых технологий, методов и материалов. Алма
-
ата.
-

1991
.

С. 71.

72.

Заявка на патент РК №980141 //
Поляков ВВ Адекенов С.М.
Надиров Р.С., Кротова С.А. Масло тополя, обладающее противоопухолевой
активностью. Положительное решение КазПатента от 07.07.99.

73.

Поляков В.В. Масло тополя
-

новый природный биологически
активный препарат для медицины и сельского
хозяйства //Материалы Респуб.
Научно
-
метод. конференции. Петропавловск. 1997.
-
Т II.
-

С. 80
-
81.

74.

Григорьев, Д.Н. Анализ рынка биологически активных добавок /
//Бизнес и медицина, 2005.
-
№5.
-

С.35
-
38

75.

Mukherjee, B. Hypolipidemic activity of Catharanthus rose
us leaf
extract in mice // Fitoterapia.


1995.


V.LXVI, N.6.


P. 483
-
487.

76.

-
indiced
hypercholesterolemia in rats // Planta med.


1998.


V.64.


P. 138
-
142.

77.

Рогинский, В.А. Фенольные антиоксиданты. Реакцион
ная
способность и эффективность


М.: Наука, 1988.


247 с.

78.

Лекарственные средства. Каталог препаратов, разработанных в
ГНЦЛС.


Харьков: Основа, 1995.
-

265 с.

79.

Дыгай А.М. Применение экстракта шлемника байкальского в
качестве гемостимулятора при цитостат
ической болезни //Методические
рекомендации.
-

М., 1992.
-

8 с.


121

80.

Е.Д. Гольдберг, А.М. Дыгай, В.И. Агафонов Принципы создания
лекарственных препаратов


стимуляторов кроветворения природного
происхож¬дения / //Экспериментальная и клиническая фармакология.


1995.
-

Т.59, № 1.
-

С. 3
-
7.

81.

on the antioxidant defense mechanism and lipid peroxidation in alcoholic liver

866; 1990.

82.

О.Ю. Катикова,
Я.В. Костин, В.С. Тишкин Гепатопротекторное
действие препаратов растительного происхождения //Экспериментальная и
клиническая фармакология.


2002.


Т. 65, №1.


С.41
-
43.

83.

Л.И. Самигуллина, Д.Н. Лазарева Новые перспективы
применения препаратов расторопши п
ятнистой //Экспериментальная и
клиническая фармакология.


2004.


Т.67, №4.


С.77
-
80.

84.

А. Тюкавкина, И.А. Руленко, Ю.А. Колесник Ю.А. Природные
флавоноиды как пищевые антиоксиданты и биологически активные добавки
/Н //Вопросы питания.


1996.
-

№ 2.
-

С.
33
-
38.

85.

И.А. Селиванова, Н.А. Тюкавкина, Ю.А. Колесник
Биофлавоноиды как микронутриенты, лекарственные средства и
биологически активные добавки к пище //Актуальные проблемы создания
новых лекарственных препаратов природного происхождения: докл. II
междунар.

съезда.


Санкт
-
Петербург, 1998.
-

С. 26
-
34.

86.

Белоусов Ю.Б., Моисеев B.., Лепахин В.К. Клиническая
фармакология и фармакотерапия.
-

М.: Универсум паблишинт, 1997,
-

532 с.

87.


Лекарственные препараты зарубежных фирм в России.
-

М.:
Астрафармсервис, 1993, с.3
50
.

88.

Рогинский, В.А. Фенольные антиоксиданты. Реакционная
способность и эффективность


М.: Наука, 1988.


247 с.

89.

Лекарственные средства. Каталог препаратов, разработанных в
ГНЦЛС.


Харьков: Основа, 1995.
-

265 с.

90.

Кочет Т.О. Фармацевтический журнал. 1971
,т.26, №1,с. 72
-
74.


122

91.

Duarte R.L.Paiva A.M.A.Rev.Portug.farmac.1966 v16 4 p.388
-
393.

92.

Lotti B.Vezzosi O.
Boll. chim.farm.1971, v.110, № 5, p.291
-
296.).

93.

М
ichaud

J
.
Bull
.
Soc
.
pharm
.
Bordeaux
, 1965,
v
.104, №1,
р
.25
-
32.

94.

Ann. pharm
. franc., 1973, v.31, №
5, p.343
-
348

95.

Chaoyang Maa, Liming Hub, Qianyun Fua, Xiaohong Gua, Guanjun
Taoa, Hongxin Wanga Separation of four flavonoids from
Rhodiola rosea

by on
-
line combination of sample preparation and counter
-
current chromatography
//Journa
l of Chromatography A.
-

2013.


Vol. 1306.


P. 12

19.

96.

H. Yin, S. Zhang, L. Long, H. Yin, X. Tian, X. Luo, H. Nan, S. He
The separation of flavonoids from
Pongamia pinnata

using combination columns
in high
-
speed counter
-
current chromatography with a thr
ee
-
phase solvent system
//Journal of Chromatography A.
-

2013.


Vol. 1315
.
-

P. 80

85
.


97.

Liu R., Li A., Sun A., Cui J., Kong L.
Preparative isolation and
purification of three flavonoids from the Chinese medicinal plant

Epimedium
koreanum

Nakai by high
-
speed counter
-
current chromatography

//
Journal of
Chromatography A.


2005.


Vol. 1064, № 1.


Р
. 53
-
57.

98.

Tian G., Zhang U., Zhang T., Yang F., Ito Y.
Separation of flavonoids
from the seeds of

Vernonia anthelmintica

Willd by high
-
speed counter
-
current
ch
romatography

//
Journal of Chromatography A.


2004.
-

Vol. 1049, № 1
-
2.


Р
.
219
-
222.

99.

Delaunay J.
-
., astagnino ., hze ., Vercauteren J. Preparative
isolation of polyphenolic compounds from
Vitis vinifera

by centrifugal partition
chromatography //Jo
urnal of Chromatography A.
-

2002.


Vol. 964, Iss. 1

2.
-

P.
123

128.

100.

Jinfang Xu, Jianguang Luo, Lingyi Kong Simultaneous separation of
triterpenoid saponins and flavonoid glycosides from the roots of
Glycyrrhiza
uralensis

Fisch by pH
-
zone
-
refining cou
nter
-
current chromatography //J. Sep. Sci.
-

2013.


Vol. 36.


P. 3295

3301.



123

101.

Qianqian Xie, Li Yin, Guoliang Zhang, Yun Wei Separation and
-
sulphate from
Flaveria bidentis

(L.) Kuntze by
counter
-
current chromatography compa
ring two kinds of solvent systems //J. Sep.
Sci.


2012.


Vol. 35.


P. 159

165.

102.

Поляков В.В, Лежнева М.Ю. Почки тополя
-

сырье, содержащее
биологически
-
активные вещества //

Разработка теорет. основ и создание
ресурсосберегающих экол. чистых технологий,
методов и материалов. Алма
-
ата.
-

1991
.

С. 71.

103.

Куркин В.А. , Браславский В.Б. , Запесочная Г.Г. Флавоноиды
почек
Populus deltoids химия природных соединений
-

1990 № 4 с. 548
-
550.

104.

Куркин В.А., Браславский В.Б., Запесочная Г.Г. Флавоноиды
почек Populus

Balzamifera химия природных соединений
-

1990 № 2 с. 272
-
273.

105.

Куркин В.А., Браславский В.Б., Запесочная Г.Г. Исследование
химического состава почек
Populus

Balzamifera

методом ВЭЖХ //
растительные ресурсы
-

1993

т 29 №3.
-

С. 85
-
90.

106.

Поляков В.В., Орлов
В.К., Шукенова Р.Ж., Муллаева Н.И.
Карбоновые кислоты Populus Balzamifera //Химия природ.соед. 1985. №6. С.
894.

107.

Донбаева Э.К., Хабаров И.А. Новые производные на основе
оксима пиностробина //
IV

Всероссийская научная конференция «Химия и
технология раст
ительных веществ .
-
Сыктывкар, 2006
-

С.68.

108.

Альжанов С.С, Кульясов А.Т. Гепатопротекторная активность
пиностробина и его оксимпроизводного // Материалы 6
-
го международного
съезда «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов
природного проис
хождения»
-

Сант
-

Петербург


2002
-

С.351
-
352.

109.

Жанымханова П.Ж. Фармакогностическое изучение
лекарственного растительного сырья почек тополя бальзамического (
Populus

balsamifera

L
.), произрастающего на территории Казахстана и его
стандартизация //
Научный
медицинский журнал «Вестник» Кыргызской

124

государственной медицинской академии им. И.К. Ахунбаева.
-

Бишкек.
2015г. №2.
-
С. 159
-
162.

110.


Жанымханова П.Ж., Мукушева Г. К., Куанбаев А.А., Адекенова
А.С., Адекенов С.М. Разработка технологических параметров получен
ия и
контроль качества густого экстракта почек тополя бальзамического //

Начно
-
практи
ческий журнал «Фармацевтический бюллетень» 2012г. №4
-
6. С. 60
-
63
.

111.

Корулькин Д.Ю., Абилов Ж.А., Музычкина Р.А., Толстиков Г.А.
Природные флавоноиды. Рос. акад. наук, Сиб. о
тд., Новосиб. ин
-
т
органической химии.
-

Новосибирск: Академическое изд
-
во «Тео», 2007.
-

232 с.
-

ISBN 978
-
5
-
9747
-
0119
-
1 (в пер.).

112.

Кульмагамбетова Э.А. Флавоноиды
Artemisia
,
Populus
,
Salsola
, их
химическая модификация и биологическая активность. Дисс ...

канд. хим.
наук.


Караганда, 2001.


157 с.

113.


Куркин В.А., Запесочная Г.Г., Браславский В.Б. Флавоноиды
почек
Populus balsamifera

L. // Химия природ. соедин.
-

1990.
-

№2.
-

C. 272
-
273.

114.

Государственную фармакопею Республики Казахстан, Т.
III
.,
2014, С. 12
3
-
126.

115.

Мукушева Г.К., Шульц Э.Э., Жанымханова П.Ж., Дуйсенбаев
Н.К., Адекенов С.М.
Новые модифицированные производные на основе
флавоноида пиностробина //
Сборник научных трудов «Химия, структура и
функция биомолекул».


Минск.


2014.


С. 135.

116.

Мукушева Г
.К., Жанымханова П.Ж., Липеева А.В., Шульц Э.Э.,
Гатилов Ю.В., Шакиров М.М, Адекенов С.М. Флаванон пиностробин в
синтезе кумаринохалконовых гибридов с триазольным линкером // Журнал
«Химия гетероциклических соединений», Латвия, г.Рига, 2015. 52(2), С.146
-
1
52.

117.

Мукушева Г.К., Жанымханова П.Ж., Турысбаева А.Ш.,
Покровский М.А., Шульц. Э.Э., Адекенов С.М.
Синтез и цитотоксическая

125

активность производных гидразона пиностробина //
Журнал «Химия
природных соединений» 2015. №3. С. 404
-
410.

118.

Мукушева Г.К., Жанымханова

П.Ж.
,
Турысбаева А.Ш.,
Богоявленский А.П., Адекенов С.М.
Изучение противовирусной активности
некоторых производных гидразона пиностробина // Фармация и
фармакология. №6 (7),
Пятигорск
, 2014.


С.92
-
95.

119.

Евразийский патент №022691 от 29.02.2016. С.М.Адекено
в.
способ получения гепатопротекторного средства на основе пиностробина из
почек тополя бальзамического (
Populus balsamifera

L.).

120.

Мукушева Г.К., Жанымханова П.Ж., Арыстан Л.И., Ли Е.А.,
Сариев А.К., Адекенов С.М. Фармакологические свойства оксима
пиностроб
ина // Сборник научных трудов «Фармакология экстремальных
состояний».
-

Санкт
-
Петербург, 2015.
Т
-
13.
-

С.112
-
113.

121.

Жанымханова П.Ж., А.А.Куанбаев, О.Ж. Исина, А.С.Адекенова,
В.В.Поляков, Б.Б.Рахимова. Разработка технологии получения оксима
пиностробина // М
атериалы
II
-
ой Международной Казахстанско
-
Российской
конференции по химии и химической технологии
-
Караганда.
-
2012.
-
Т.2.
-
С.337
-
338.

122.

Жанымханова П.Ж. Технология получения субстанции оксима
пиностробина и его стандартизация //
Научный медицинский журнал
«Ве
стник» Кыргызской государственной медицинской академии им. И.К.
Ахунбаева.
-

Бишкек. 2015г. №2.
-
С. 163
-
168.

123.

Тихонова Е.В., Жанымханова П.Ж., Смагулов А.М., Итжанова
Х.И., Поляков В.В., Адекенов С.М. Сублимационная сушка субстанции
липосомального оксима пи
ностробина //

Высокие технологии,
фундаментальные и прикладные исследования в физиологии и медицине:
сборник трудов.
-

Том 1.
-

Санкт
-
Петербург, 2010.


С. 229
-
231.

124.

Тихонова

Е.В.
, Жанымханова П.Ж., Итжанова Х.И., Поляков
В.В., Адекенов С.М.
В
лияние вспомогат
ельных веществ на технологические
характеристики модельных смесей липосомальных субстанций оксима

126

пиностробина // Современная фармацевтическая наука и практика: традиции,
инновации, приоритеты. Самара, 2011.


С. 176
-
177.

125.

Тихонова Е.В., Жанымханова П.Ж., А
декенова А.С., Поляков
В.В., Адекенов С.М. Оценка



критериев



качества



капсул



пиностробина

оксима липосомального //

«Разработка, исследование и
маркетинг новой фармацевтической продукции» Выпуск 66.
-
Пятигорск,
2011.
-
С. 325
-
326.

126.

Itzhanova K.H., Zh
anymkhanova P.Zh., Mukusheva G.K., Adekenov
S.M. The transdermal medical system with pinostrobin oxime //
International
scientific and practical conference «Achievements and Prospects for the
Devolopment

of Phytochemistry» Karaganda.
-

2015.

P.


197.

127.

Zha
nymkhanova P. Zh.,

Zabaeva A.N.,
Orazbayeva P.Z.,

Itzhanova
K.H., Mukusheva G.K., Adekenov S.M. Devolopment of technology of caps
ules
oxime of pinostrobin 50 mg //
International scientific and practical conference
«Achievements and Prospects for the
Devolo
pment

of Phytochemistry»
Karaganda.
-
2015.

P.


201.

128.

Toregozhina Z.R., Orazbayeva P.Z., Adekenova A.S.,
Zhanymkhanova P.Zh.,

Tuleuova G.H., Adekenov S.M. Standartization oxime of
pinostrobin //
International scientific and practical conference «Achievemen
ts and
Prospects for the
Devolopment

of Phytochemistry» Karaganda.
-
2015.

P.


186.










127

ПРИЛОЖЕНИЕ А

Лабораторный регламент на получение субстанции пиностробина





128

ПРИЛОЖЕНИЕ
Б

Опытно
-
промышленный регламент на получение субстанции
пиностробина



129

П
РИЛОЖЕНИЕ
В

Государственная фармакопея Республики Казахстан



130




131





132

ПРИЛОЖЕНИЕ Г

Аналитический нормативный документна на субстанцию

оксима пиностробина





133

ПРИЛОЖЕНИЕ Д

Опытно
-
промышленный регламент на производство субстанции


оксима пиностробина




134

ПРИЛ
ОЖЕНИЕ Е

Аналитический нормативный документна на
лекарственную
форму

оксима пиностробина




135

ПРИЛОЖЕНИЕ Ж

Опытно
-
промышленный регламент на производство капсул


оксима пиностробина 50 мг



136

ПРИЛОЖЕНИЕ З

Акт в
недрения на производство субстанции оксима пиностро
бина
и готовой формы на его основе




Приложенные файлы

  • pdf 14890163
    Размер файла: 2 MB Загрузок: 0

Добавить комментарий